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【目的】:探讨NF-κB mRNA在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)生存/凋亡中的表达研究。
【方法】:体外培养HUVEC细胞，实验分组：正常对照组、AngⅡ处理组和Gliotoxin干预组。采用改良的四噻唑蓝(MTT)比色法观察0.01μM、0.1μM、1μM和10μMAngⅡ分别作用于HUVEC细胞6h、12h、18h和24h时细胞活性情况。应用光学显微镜观察不同浓度AngⅡ作用于HUVEC细胞形态学变化。应用琼脂糖凝胶电泳检测不同浓度AngⅡ分别作用于HUVEC细胞的“Ladder”图。应用流式细胞仪检测不同浓度AngⅡ分别作用于HUVEC细胞的凋亡率。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测三种AngⅡI浓度(0.1μM、1μM和10μM)分别作用于HUVEC细胞0.5h、1h、2h和4h时NF-κB；p65 mRNA表达情况。应用SPSS12.0进行统计学分析，数据采用单因素方差分析，随后用q检验进行两两比较，以P<0.05判定差异具有统计学意义。
【结果】:实验结果表明：(1)1μM AngⅡ作用24h和10μM AngⅡ作用12h～24h时，细胞活性明显降低，与正常对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。0.1mg/L Gliotoxin可拮抗AngⅡ对HUVEC生长的作用，细胞活性明显增加，与AngⅡ处理组相比差异有统计学意义(P<0.05)，而与正常对照组相比较差异无统计学意义(P>.05)。(2)琼脂糖凝胶电泳结果表明：10μM A ngⅡ作用于HUVEC细胞24h，细胞发生凋亡，电泳泳道上出现明显的“梯”状条带。(3)流式细胞结果表明：与正常组相比，10μMAng Ⅱ作用细胞24h后细胞凋亡率明显高于正常组，差异具有统计学意义(P<0.05)；Gliotoxin干预组细胞凋亡率与正常对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。(4)半定量RT-PCR结果显示：AngⅡ(0.1μM、1μM和10μM)作用于HUVEC细胞0.5h时，HUVEC细胞中NF-κB p65 mRNA对对表达量变化不明显，与正常对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)；10μMAng Ⅱ组作用1h、2h和4h时与正常组相比较，NF-κBp65 mRNAN对表达量差异有统计学意义(P<0.05)；AngⅡ(0.1μM和1μM)组作用2h和4h时与正常组比较，HUVEC细胞％NV-κBp65lmRNNH对表达量差异有统计学意义(P<0.05)；与0.1μMAngⅡ组相比较，10μMAngⅡ组作用2h和4h时HUVEC细胞中NF-κBp65 mRNN对表达量的差异有统计学意义(P<0.05)。
【结论】：(1)AngⅡ能够引起HUVEC细胞形态改变，细胞活性降低，细胞凋亡率增高，DNA断裂呈“梯”状条带，其程度与Ang Ⅱ呈剂量依赖性。(2)NF-κB特异性抑制剂Ghotoxin能够拮抗Ang Ⅱ对HUVEC细胞抑制生长和促进凋亡作用。(3)AngⅡ可以作为HUVEC细胞中NF-κBp65 mRNA的诱导剂，随着AngⅡ的浓度增加而NF-κBp65 mRNA的表达增加，NF-κBp65 mRNA表达在Ang Ⅱ调控HUVEC细胞生存/凋亡过程中可能起作用。