第一部分RGD多肽修饰的聚天冬氨酸离子复合物胶束靶向治疗恶性胶质瘤的实验研究目的：制备稳定的(耐盐、耐PH值变化)RGD-PIC，利用胶质瘤细胞及动物模型体内、体外验证主动免疫靶向技术，为制备用于治疗耐药性癫痫的靶向载药纳米胶束提供实验基础。方法：以马来酰亚胺基单封端聚乙二醇(Mal-PEG-OH)为起始剂，采用主动免疫靶向技术制备RGD多肽修饰的聚天冬氨酸离子复合物胶束(RGD-PIC)。通过体外培养的大鼠海马神经元及U87胶质瘤细胞系，CCK-8法检测RGD-PIC对胶质瘤细胞的识别和杀伤作用。制备量子点标记的RGD-PIC，荧光显微镜观察RGD-PIC的细胞分布情况。C6胶质瘤细胞系尾状核立体定向注射法制备大鼠恶性胶质瘤动物模型，外周给予RGD-PIC，结合量子点标记技术，观察RGD-PIC对胶质瘤的病灶靶向作用，免疫组织荧光染色分析RGD-PIC是否诱导了caspase-3的表达，以及对正常脑组织区的影响。结果：合成的RGD-PIC表现为大小均一的纳米结构，与U87细胞共培养后能聚集于细胞内，而对神经元无此作用。RGD-PIC体外可抑制U87细胞的增殖，而对神经元无影响。体内实验表明，RGD-PIC特异性聚集于胶质瘤生长区，诱导了caspase-3表达增强，对正常脑组织区无此影响。结论：设计合成的RGD-PIC可体外选择性杀伤胶质瘤细胞，体内靶向作用于胶质瘤细胞，并诱导胶质瘤细胞的凋亡。第二部分多药转运体P-gp在耐药性边缘叶癫痫模型大鼠中的表达及分布目的：明确耐药性癫痫大鼠与正常大鼠，非耐药性癫痫大鼠相比，不同组织内P-gp的表达差异．以及P-pg在不同器官内的分布情况。方法：利用苯妥英钠自氯化铝-匹鲁卡品诱导的癫痫SD大鼠中筛选出耐药性癫痫大鼠，结合westernblot、RT-PCR和免疫组织化学染色等方法检测正常、非耐药性癫痫和耐药性癫痫大鼠的海马区、大脑皮层、间脑、肝脏、肾脏、小肠等部位P-gp的表达、分布情况。结果：耐药性癫痫大鼠大脑海马区、皮层P-gp表达显著高于正常组及非耐药性癫痫组(P＜0．05)。耐药性癫痫大鼠的脑内海马及皮层P-gp表达于微血管内皮细胞，肝脏、肾脏及小肠的P-gp的微血管内皮细胞未见P-gp表达。结论：耐药性癫痫大鼠的P-gp表达水平高于正常或非耐药性癫痫大鼠。微血管内皮细胞表达P-gp的情况仅见于大脑皮层和海马；分泌、吸收器官(肝脏、肾脏和小肠)的P-gp表达于血管外组织。P-gp可作为耐药性癫痫靶向释药的靶点。第三部分P-gp单克隆抗体修饰的苯妥因钠米纳米粒子的制备、表征及生物相容性目的：利用纳米材料独特的表面效应，采用微纳米粒子免疫靶向技术将P-gp单克隆抗体富集于共聚物纳米粒子上，制备一种结构稳定的外富P-gp单抗，内集AEDs的新型微纳米结构(P-gpMAb Nano-structured material，PNM)。并验证其在中枢神经系统的生物相容性。方法：以马来酰亚胺基团或甲氧基封端的聚乙二醇为起始剂，在辛酸亚锡做催化剂的情况下，合成单甲氧基封端的聚乙二醇-聚己内酯(MePEG-PCL)两嵌段共聚物和马来酰亚胺基封端的聚乙二醇-聚己内酯(Mal-PEG-PCL)两嵌段共聚物。巯基化抗P-gp单克隆抗体，并合成PNM。透射电镜观察PNM的形态学特征。红外谱图分析和1H NMR谱图分析合成物的基团改变情况。DSL检测PNM对不同pH值和不同盐浓度的稳定性。HPLC检测PNM的释药情况。CCK-8法检测PNM对神经元、星形胶质细胞、小胶质细胞和脑微血管内皮细胞的生存率的影响。结果：PNM为150nm-200nm的壳核状纳米粒子，在PH(7．3-8．5)范围内，PNM的相对光强值保持在90％以上。PNM在0％的NaCl和0．9％NaCl溶液中的相对光强值分别为92．6％和91．6％，没有明显差异(P＞0．05)。HPLC测得其载药量为21．45％，有近9小时的匀速释放，在整个释放过程中没有出现明显的突释现象。5天内50mg／L的PNM不影响脑微血管内皮细胞、小胶质细胞和神经元，但星形胶质细胞的生存率下降至88．90％，p＜0．05。结论：我们设计的PNM合成方案能顺利制备结构稳定PHT缓释制剂PNM。PNM与神经元、小胶质细胞和脑微血管内皮细胞的生物相容性较好，但对星形胶质细胞的生存率有影响。存在进一步改进的空间。第四部分PNM治疗耐药性癫痫的实验研究目的：体内和体外实验检测我们设计、合成的PNM对耐药性癫痫的靶向治疗作用。方法：体外培养大鼠海马神经元，给予无镁处理及PNM处理，进行全细胞膜片钳记录电生理改变，CCK-8法检测神经元生存率的改变，ANNEXIN V流式细胞仪检测神经元凋亡情况。分别用氯化铝-匹鲁卡品和最大电休克法诱导慢性海马癫痫，苯妥因钠筛选耐药性癫痫大鼠。静脉给予不同浓度的PNM，记录脑电图，微透析法取得大鼠脑脊液，HPLC检测其PHT浓度，眼球取血，ELISA检测TNF-α浓度。结果：给予PNM100μg／ml干预72小时后，神经元的痫样放电的其频率和波幅均较对照组明显减低，降为2-6次／min，且神经元自身的EPSP也有明显改善。给予20μg／mlPHT干预72小时后，神经元生存率的变化情况与PNM组神经元生存率的变化一致。PNM能使神经元的凋亡比率从无镁处理组的75．3％下降到无镁+PNM组的30．2％，降低45．1％(p＜0．05)。动物实验表明，与PHT组相比，PNM能明显改善耐药性癫痫大鼠脑电图中的异常表现，提高脑内PHT的浓度。PNM对耐药性癫痫大鼠血液中TNF-a影响较小。结论：我们设计合成的PNM能体外抑制神经元的痫样放电，降低无镁处理诱导的细胞凋亡，提高细胞生存率，效果与PHT无显著差异；该PNM显著提升了PHT的脑内释药，治疗耐药性癫痫的效果显著优于PHT，且对炎症细胞因子的影响与PHT无异。结论：RGD修饰的RGD-PIC纳米粒子可体外选择性杀伤胶质瘤细胞，体内靶向作用于胶质瘤细胞，并诱导胶质瘤细胞的凋亡。P-gp可以作为耐药性癫痫靶向释药的靶点分子。以P-gp单克隆抗体修饰的苯妥因钠载药纳米胶束PNM对于癫痫细胞模型有保护作用，对于耐药性癫痫动物模型具有靶向治疗作用。在耐药性癫痫动物模型中可逃逸抗原呈递细胞的识别和清除。