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第一部分缺氧对绒毛外滋养细胞株VEGFC表达的影响 目的:研究二氯化钴(CoCl2)缺氧条件下绒毛外滋养细胞 VEGFC表达情况,探讨缺氧对绒毛外滋养细胞VEGFC表达的影响,并分析VEGFC与Maspin表达间的相关性。 方法: 1.采用二氯化钴(CoCl2)构建人早孕绒毛外滋养细胞株(TEV-1)化学缺氧模型。2.采用荧光定量 PCR法及 Western Blot法分别检测绒毛外滋养细胞株 VEGFC mRNA及蛋白的表达情况。 结果: 1.荧光定量PCR结果显示缺氧24小时,绒毛外滋养细胞株VEGFC mRNA表达明显升高,是正常对照组的2.7倍,差异具有统计学意义。 2.Western Blot结果显示缺氧24小时,绒毛外滋养细胞株VEGFC蛋白量明显高于对照组,差异有统计学意义。 结论:缺氧可以使绒毛外滋养细胞株中Maspin表达明显增高,同时VEGFC的表达也相应升高,两者之间的变化趋势基本一致。因此推测 VEGFC可能参与了maspin对绒毛外滋养细胞的调控。 第二部分重组人Maspin蛋白对绒毛外滋养细胞株VEGFC表达的影响 目的:研究常氧及缺氧时重组人Maspin蛋白对绒毛外滋养细胞株VEGFC表达的影响,探讨Maspin蛋白对绒毛外滋养细胞株VEGFC表达的调节机制。 方法: 1.采用二氯化钴(CoCl2)构建绒毛外滋养细胞株化学缺氧模型。 2.常氧及缺氧条件下,利用不同浓度重组人Maspin蛋白干预绒毛外滋养细胞。 3.采用荧光定量 PCR法 Western Blot法分别检测绒毛外滋养细胞株 VEGFC mRNA及蛋白的表达情况。 结果: 1.在常氧条件下,重组人Maspin蛋白干预24小时以后,随着蛋白浓度的增加绒毛外滋养细胞株 VEGFC表达明显升高,干预48小时以后绒毛外滋养细胞株VEGFC的表达未见明显变化。 2.在缺氧条件下,重组人Maspin蛋白干预24小时后随着蛋白浓度的升高绒毛外滋养细胞株VEGFC的表达量反而逐渐降低,在48小时以后VEGFC的表达明显降低。 结论:在常氧条件下重组人Maspin蛋白上调绒毛外滋养细胞株VEGFC的表达,在缺氧条件下重组人Maspin蛋白下调绒毛外滋养细胞株VEGFC的表达。 第三部分脱甲基化药物对绒毛外滋养细胞株VEGFC表达的影响 目的:研究脱甲基化药物在常氧及缺氧条件下对绒毛外滋养细胞株 VEGFC表达的影响,探讨脱甲基化药物对绒毛外滋养细胞株VEGFC表达的调节机制。 方法: 1.采用二氯化钴(CoCl2)构建绒毛外滋养细胞株化学缺氧模型。 2.在常氧及缺氧条件下,利用不同浓度的脱甲基化药物干预绒毛外滋养细胞株。 3.采用荧光定量 PCR法及 Western Blot法分别检测绒毛外滋养细胞株 VEGFC mRNA及蛋白的表达情况。 结果: 1.在常氧条件下脱甲基化药物干预24小时和48小时后,绒毛外滋养细胞株VEGFC的表达量随着脱甲基化药物浓度的增加,出现先升高后降低的变化,峰值分别是正常对照的5.6倍和2.6倍,都是在药物浓度为1.0μmol/L时出现。2.在缺氧条件下脱甲基化药物干预24小时和48小时后,绒毛外滋养细胞株VEGFC的表达量变化随着脱甲基化药物浓度的增加,出现先升高后降低的变化,但差异无统计学意义。 结论:脱甲基化药物5-氮杂-2′-脱氧胞苷可以使绒毛外滋养细胞株 VEGFC的表达增加,这一效应是呈剂量依赖性的。而缺氧可以抑制5-氮杂-2′-脱氧胞苷对VEGFC表达的促进作用。 第四部分重组人VEGFC蛋白对绒毛外滋养细胞株迁移与侵袭能力的影响 目的:研究常氧及缺氧条件下重组人VEGFC蛋白干预后的绒毛外滋养细胞株迁移与侵袭能力变化,探讨重组人VEGFC蛋白对绒毛外滋养细胞株迁移与侵袭的调节机制。 方法: 1.采用二氯化钴(CoCl2)构建绒毛外滋养细胞株化学缺氧模型。 2.在常氧及缺氧条件下,利用不同浓度的重组人VEGFC蛋白干预绒毛外滋养细胞株。 3.利用Transwell细胞迁移与侵袭实验检测绒毛外滋养细胞株迁移与侵袭能力的变化。 结果: 1.在常氧条件下随着重组人VEGFC蛋白浓度升高绒毛外滋养细胞株的迁移与侵袭能力逐渐增加。 2.在缺氧条件下随着重组人VEGFC蛋白浓度升高绒毛外滋养细胞株的侵袭能力逐渐降低,而迁移能力无明显改变。 结论:在常氧条件下重组人 VEGFC蛋白可以促进绒毛外滋养细胞株的迁移与侵袭能力。而在缺氧条件下重组人VEGFC蛋白反而抑制绒毛外滋养细胞株的侵袭能力。