【摘 要】
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目的采用数字基因表达谱技术探讨BDE-47对3T3-L1细胞分化的影响及可能机制。方法:在“经典鸡尾酒”法(MDI)的基础上,将3T3-L1细胞分为七组:不同浓度BDE-47(2.5μM、7.5μM、12.5μM、18.75μM、25μM)干预组,阳性对照组(1μM噻唑烷二酮)和阴性对照组(0.1%DMSO),进行体外诱导分化。未分化阶段采用MTT法检测BDE-47对3T3-L1细胞活力的影响;分
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目的采用数字基因表达谱技术探讨BDE-47对3T3-L1细胞分化的影响及可能机制。方法:在“经典鸡尾酒”法(MDI)的基础上,将3T3-L1细胞分为七组:不同浓度BDE-47(2.5μM、7.5μM、12.5μM、18.75μM、25μM)干预组,阳性对照组(1μM噻唑烷二酮)和阴性对照组(0.1%DMSO),进行体外诱导分化。未分化阶段采用MTT法检测BDE-47对3T3-L1细胞活力的影响;分化第8天采用油红O染色及测定OD值观察脂肪细胞脂滴聚集情况;组织细胞甘油三酯酶检测3T3-L1细胞分化后胞浆甘油三酯(TG)含量;采用数字基因表达谱分析差异基因的表达;RT-PCR测定细胞中瘦素、脂联素、PPARγ的m RNA相对表达量。结果:1.MTT结果显示,7组3T3-L1细胞活力比较差异均具有统计学意义(P<0.05),BDE-47浓度大于100μM时,1h～48h的细胞活力均低于正常组(P<0.05),12.5μM和25μM时,与正常组比较无统计学意义(P>0.05);2.油红O染色结果显示,阳性对照组、低剂量组、较低剂量组有大量细胞被染成红色,脂滴比较丰富,中剂量组被染成红色区域与其他剂量组相比较少,颜色较浅;油红O染液定量结果显示BDE-47高、较高、较低及低剂量组OD值高于对照组(P<0.05),BDE-47干预组OD值呈先降低后增加趋势;3.分化后胞浆TG含量随BDE-47浓度增加开始下降,到一定浓度时(12.5?M)逐渐开始上升。4.数字基因表达谱分析结果显示高剂量BDE-47干预组相较于阴性对照组、阳性对照组分别引起3718和2316个基因的差异表达,涉及柠檬酸循环,氧化磷酸化过程,胰岛素信号通路,AMPK信号通路,胰岛素抵抗等代谢相关基因的差异表达,并影响脂肪细胞分化。5.BDE-47干预组PPARγ基因的m RNA相对表达量升高:BDE-47干预组PPARγ基因的m RNA相对表达量均高于阴性对照组,低于阳性对照组(P<0.05),高剂量组、低剂量组、较低剂量组PPARγ基因的m RNA相对表达量升高(P<0.05),中剂量组PPARγ基因的m RNA相对表达量降低;BDE-47中剂量组与阴性对照组相比较Adiponectin基因的m RNA相对表达量降低,差异具有统计学意义(P=0.03);BDE-47中剂量组相较于阳性对照组Leptin基因的m RNA相对表达量降低(P=0.01)。结论:BDE-47对3T3-L1细胞分化起促进作用,TG合成增加,BDE-47可能通过激活PPAR-γ活性诱导脂肪细胞分化;引起AMPK信号通路,胰岛素抵抗等代谢通路相关基因的差异表达,高剂量和低剂量BDE-47干预组对细胞分化的影响差异表达基因数量较多,对脂肪细胞分化的影响较大。
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