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以苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis)菌株YBT-1520的bel(Bacillusenhancin like)基因为研究对象,对苏云金芽胞杆菌的Bel蛋白的增效活性和增效机制做了深入研究,从而进一步认识bel基因的生物学功能。主要研究结果如下:1.BMB171中bel基因的敲除和生物活性的测定利用同源重组的方法敲除BMB171菌株中的bel蛋白基因,得到了突变株BMB1084。将表达杀虫晶体蛋白基因cry1Ac的重组质粒pBMB1086转入菌株BMB171和突变株BMB1084,分别构建重组菌BMB1087和BMB1088。用两个重组菌的胞晶混合物分别感染棉铃虫一龄幼虫,结果重组菌BMB1087和BMB1088的LC50分别为0.46mL/mL和2.73mL/mL,增效倍数为5.83,表明未敲除bel基因的Bt能提高Cry1Ac对棉铃虫幼虫的毒力。2.bel基因的大量表达和生物活性的测定从苏云金芽胞杆菌YBT-1520菌株中扩增出增效蛋白基因bel,以pGEX-6p-1为载体在大肠杆菌BL21中表达融合增效蛋白,通过亲和层析提纯到该融合增效蛋白,并测定其分子量为113KD。以棉铃虫为供试昆虫,测定Bel蛋白对杀虫晶体蛋白Cry1Ac杀虫的增效活性,结果显示当配比为Bel蛋白(0.8ug/mL)+Cry1Ac(3ug/mL)时,棉铃虫的死亡率为74.4%,比不添加Bel蛋白的34.2%增加120%,说明Bel蛋白能显著提高Cry1Ac对棉铃虫幼虫的毒力。同时以仅含Bel蛋白(1ug/mL)的饲料喂养棉铃虫,实验结果显示增效蛋白可以明显减缓棉铃虫幼虫体重的增长,说明该增效蛋白对棉铃虫生长有弱化作用。3.Bel蛋白增效机制的研究通过体内和体外Bel蛋白的增效机制的探讨,找出Bel蛋白增效机制。体内增效机制研究:将含Bel蛋白(1ug/mL)的饲料喂养5龄棉铃虫1.5天,提取棉铃虫围食膜(PM),通过扫描电镜的观察,发现喂食Bel蛋白的棉铃虫PM较薄并且有穿孔现象。这样加大了Cry1Ac穿过PM的量,通过增加感染量来增加了Cry1Ac和肠上皮细胞受体结合的量。体外增效机制研究(此结果由河北农业大学提供):用2ug/mL的Bel蛋白处理T.ni围食膜,SDS-PAGE后,以T.niⅡM抗体作为一抗,进行Western Blot检测。同时以T.ni的Enhancin蛋白处理T.ni围食膜作阳性对照,结果Bel蛋白可以体外降解T.ni的ⅡM。同样2ug/mL Bel蛋白体外处理HaⅡM86蛋白4小时后,SDS-PAGE后,以HaⅡM86抗体作为一抗,Western Blot检测。结果Bel蛋白可以体外降解棉铃虫肠粘蛋白HaⅡM86。4.高效杀虫的苏云金芽胞杆菌基因工程菌的构建利用了Bel蛋白的增效特性,构建出了一株高效杀虫的苏云金芽胞杆菌基因工程菌BMB171/pHT304/bel+cry1Ac。结果:导入了bel基因的工程菌BMB0187对棉铃虫的杀虫毒力明显比未导入bel基因的菌株BMB171/pHT304/cry1Ac强,而且相对增效倍数为3倍。