鸡白细胞介素18成熟蛋白的表达及其部分免疫功能研究

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白细胞介素18(Interleukine-18,IL-18)是1995年由Okmura等发现的一种细胞因子,具有强烈的IFN-γ诱生能力,在机体免疫调控中具有重要作用.鸡IL-18(Chicken IL-18,ChIL-18)则是Schneider等2000年发现的.医学生物学研究证明IL-18在抗微生物感染、抗肿瘤免疫中具有应用潜力.对于ChIL-18的研究尚处于起步阶段,该实验室在前期的研究中克隆到了chIL-18成熟蛋白基因,该研究中,将此基因亚克隆至原核表达载体pPROEXHT中,构建重组质粒并进行确证性序列测定.然后将重组质粒转化大肠杆菌DH5α并用IPTG于37℃诱导培养获得表达,表达形式为包涵体.凝胶薄层灰度扫描显示表达的融合蛋白约占菌体蛋白的30%.SDS-PAGE和Western blot分析显示,表达的鸡IL-18融合蛋白分子量约为23kDa.包涵体通过6M盐酸胍裂解后,利用镍离子亲和树脂进行纯化.用所获得的重组ChIl-18融合蛋白及其纯化产物经三次肌肉注射豚鼠,制备豚鼠抗ChIL-18多克隆抗体.琼脂扩散实验表明制备的多克隆抗血清与ChIL-18具有良好的反应性.由于原核表达系统存在蛋白修饰不完全的缺点,该研究中还用昆虫细胞/杆状病毒真核表达系统以期表达在结构和活性上更接近天然chIL-18的重组蛋白.
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