【摘 要】
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捻转血矛线虫是一种会给畜牧业造成严重经济损失的牛羊胃肠道寄生虫。目前,捻转血矛线虫的防治主要依赖苯丙咪唑类驱虫药,但已有研究表明产生了耐药性虫株,为有效防治捻转血矛线虫,急需开发新的防治策略。疫苗是其中研究较多的方向之一,但是,对来源于虫体保护性组分的免疫生物学特征缺乏全面了解是制约疫苗研究的主要原因之一。因此,捻转血矛线虫与宿主的相互作用的研究对有效疫苗的开发尤为重要。本实验室以前的研究发现,捻
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捻转血矛线虫是一种会给畜牧业造成严重经济损失的牛羊胃肠道寄生虫。目前,捻转血矛线虫的防治主要依赖苯丙咪唑类驱虫药,但已有研究表明产生了耐药性虫株,为有效防治捻转血矛线虫,急需开发新的防治策略。疫苗是其中研究较多的方向之一,但是,对来源于虫体保护性组分的免疫生物学特征缺乏全面了解是制约疫苗研究的主要原因之一。因此,捻转血矛线虫与宿主的相互作用的研究对有效疫苗的开发尤为重要。本实验室以前的研究发现,捻转血矛线虫的钙网织蛋白(Haemonchus contortus calreticulin,Hc-CRT)和热休克蛋白70(Haemonchus contortus heat shock protein,Hc-HSP70)能够引起绵羊外周血单核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)的Th2型免疫应答,本实验进一步对Hc-CRT和Hc-HSP70蛋白是否可以刺激宿主巨噬细胞成熟分化以及引起CD4+T细胞介导的免疫应答反应进行了研究。本实验从绵羊全血中获得外周血单核细胞,体外培养得到巨噬细胞。通过吞噬鸡红细胞实验验证巨噬细胞活力,利用流式检测法验证巨噬细胞CD14的阳性率;使用重组蛋白Hc-CRT和Hc-HSP70刺激绵羊巨噬细胞,通过Real time-PCR分析巨噬细胞M1极化相关因子INOS、IL-6和M2极化相关因子Arg-1、IL-10的表达水平。结果发现Hc-CRT和Hc-Hsp70能够上调Arg-1和IL-10的表达水平,下调IL-6的表达水平,同时通过ELISA验证了上述结果。所以,Hc-CRT和Hc-HSP70蛋白能有效的活化巨噬细胞,促进巨噬细胞介导宿主引起保护性免疫反应。然后,将分选的巨噬细胞用Hc-CRT和Hc-HSP70蛋白刺激后,与CD4+T细胞共孵育,检测CD4+T细胞因子IFN-γ、IL-4表达水平,发现IFN-γ、IL-4显著上调。结果表明Hc-CRT和Hc-HSP70蛋白能够促进巨噬细胞功能成熟,活化CD4+T细胞,诱导宿主的Thl和Th2混合型免疫应答。本课题为捻转血矛线虫与绵羊巨噬细胞相互作用提供了新的方向,为进一步阐明捻转血矛线虫引起绵羊免疫应答的潜在机制及特异性疫苗的研究提供了理论基础。
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