论文部分内容阅读
肠出血性大肠杆菌O157:H7(Escherichia coli O157:H7)和鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)是目前世界公认的引起食源性疾病的重要致病菌。本研究针对传统检测方法耗时长、过程繁琐的缺点,建立了同时检测食品中肠出血性大肠杆菌O157:H7和鼠伤寒沙门氏菌的快速免疫检测方法。具体结果如下:1、为了制备抗肠出血性大肠杆菌O157:H7和鼠伤寒沙门氏菌的特异性抗体,本研究制备了两类免疫原包括盐酸胍提取的细胞表面蛋白免疫原(GCSPE, GCSPS)与热致死(HKE,HKS)和福尔马林致死(FKE,FKS)整细胞免疫原。2、用肠出血性大肠杆菌O157:H7细胞表面蛋白为免疫原,经过小鼠的免疫,细胞融合最后得到19个杂交瘤细胞系能够产生E.coli O157:H7特异抗体,其中1D11杂交瘤细胞系产生的单克隆抗体对E.coli O157:H7具有很强的特异性和亲和力,抗体的效价达到了1:25600。3、用鼠伤寒沙门氏菌细胞表面蛋白为免疫原,最终获得了12个杂交瘤细胞产生抗Salmonella typhimurium的抗体,其中2G6杂交瘤细胞系产生的单克隆抗体对Salmonella typhimurium具有很强的特异性和亲和力,抗体的效价达到了1:12800.4、用整细胞为免疫原,经过对产蛋鸡的免疫,WD-AS的分离纯化分别获得了抗E.coli O157:H7和Salmonella typhimurium的特异性好,亲和力强的卵黄多克隆抗体。E.coli O157:H7的卵黄抗体的效价和Salmonella typhimurium卵黄抗体的效价都达到了1:3200。5、利用制备的40nm胶体金标记单克隆抗体1D11和2G6,用卵黄抗体作为检测抗体,分别建立了E.coli O157:H7免疫层析检测试纸条和salmonella typhimurium免疫层析检测试纸条。试纸条特异性强,可分别检测到10~5 CFU/ml的E.coli O157:H7和salmonella typhimurium。6、利用胶体金标记单克隆抗体1D11和2G6作为扑捉抗体,卵黄抗体作为检测抗体,建立了同时检测E.coli O157:H7和Salmonella typhimurium的免疫层析技术。同时检测试纸条的检出限为10~5CFU/ml,经SEL选择性增菌培养液10 h增菌后,检出限可达10~2 CFU/ml。