目的与意义： 结肠定位给药系统主要包括pH依赖型、时滞型和菌群触发型给药系统，是药剂学研究的一个热点。由于pH依赖型和时滞型系统存在许多不确定的因素，即由于消化道的pH值以及药物转运时间受食物，特别是疾病个体因素影响较大，给药后的定位性较差，故现在菌群触发型给药系统受到日益广泛的重视。本项目以易受结肠菌群释放酶降解的壳聚糖为主要药物载体，选择了重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)、5-氨基水杨酸(5-ASA)和地塞米松磷酸钠(DSP)3种模型药物，进行了结肠定位给药制剂的研究。 rhG-CSF属蛋白及多肽类药物，目前只能通过注射给药途径产生确定的疗效，但口服给药时胃酸及消化道中多种蛋白分解酶对蛋白多肽药物的降解作用以及大分子化合物较难透过生物膜，故口服无效。由于结肠部位的蛋白分解酶浓度远小于消化道其它区段，而且药物在该部位停留时间可较长，同时结肠壁对大分子穿透的阻力也比小肠小。因此，结肠定位给药为rhG-CSF口服给药提供了一种可能性。目前rhG—CSF结肠定位壳聚糖胶囊剂的研究未见国内外文献报道。本课题尚通过使吸收促进剂与rhG-CSF同时在结肠定位释放，从而达到对rhG-CSF口服吸收的协同促进作用，具有其他许多剂型不具备的优点。 5-ASA是治疗溃疡性结肠炎、节段性结肠炎的有效药物，其药效取决于它对结肠壁表面的作用，但口服给药时5-ASA在胃、小肠内即被吸收，使分布到结肠的药物很少，而且吸收入血的5-ASA还会引起全身严重的药物不良反应。因此，研究5-ASA结肠定位给药制剂实用价值高。目前，用壳聚糖胶囊作为包裹材料来制备5一ASA的结肠定位给药制剂尚未见国内文献报告。 DSP通常经口服或灌肠来治疗结肠炎，同5一ASA一样，口服给药时，药物容易从胃，小肠等部位吸收，故在结肠局部的浓度相对减少，而加大口服剂量则大大增加血药浓度，引起全身不良反应，甚至感染死亡的问题。灌肠方法给药时，患者必须在医护人员的协助下治疗，而且这种治疗方法仅对远端结肠和直肠部位病变有效，而升结肠和横结肠等部位病变时难以通过灌肠技术给药。另一方面，脂质体在许多相关的研究中显示了直接局部应用时具有提高药物局部生物利用度的作用，因此将DSP包裹在脂质体中，用结肠定位给药技术使其在结肠局部释放时，就有望发挥载药脂质体在局部炎症治疗中的作用，进一步提高DSP的局部治疗效果，此也为本课题的主要创新和特色之一。有关探索载药脂质体经结肠粘膜吸收的规律性研究以及利用壳聚糖作为载体将DSP脂质体冻干粉剂导向结肠的研究尚未见国内外文献报道。方法: (1)制备rhG一CSF冻干粉剂，将其装入壳聚糖胶囊中，再以邻苯二甲酸轻丙基甲基纤维素(HPMCP)包裹胶囊，用氮兰四哇蓝(MTT)比色法测定其在人工胃液及人工小肠液中的体外释放性能。将荧光素钠(FS)作为模型化合物在相同条件下进行实验，以激发波长470nm、发射波长513nm荧光检测FS壳聚糖胶囊在人工大肠液中的体外释放性能。用扫描电镜法评价壳聚糖胶囊在大肠内容物中的降解作用。于rhG一CSF冻干粉剂壳聚糖胶囊中加入不同量的胆酸钠(SC)后，在轻度乙醚麻醉下通过聚乙烯管给正常大鼠和环磷酞胺(CPA)所致白细胞降低大鼠口服胶囊，观察大鼠白细胞总数(BTL)经时变化规律。测定各种rhG一CSF制剂的经时血药浓度，并计算曲线下面积和相对生物利用度。 (2)将5一氨基水杨酸(5一ASA)装于壳聚糖胶囊中，再以HPMCP包裹胶囊，以紫外分光光度法测定其在人工胃液及人工小肠液中的体外释放性能。在轻度乙醚麻醉下通过聚乙烯管给大鼠口服5一ASA壳聚糖胶囊，对照组口服5一ASA梭甲基纤维素(CMC)混悬液。于给定的时间间隔取血，取出结肠组织，分离提取药物，用HPLC法测定大鼠血液及结肠中药物的浓度，并计算药物的相对靶向释药指数。 (3)用二次乳化法，经正交试验来筛选地塞米松磷酸钠(DSP)脂质体的配方。测定脂质体的包裹率和载药量，观察脂质体的形态和粒径大小分布。建立HPLC法测定DSP浓度的方法。采用体外Ussing Chamber实验法，考察DSP脂质体经时经兔结肠粘膜的透过规律性。制备DSP脂质体冻干剂，将其装入壳聚糖胶囊中，再以HPMCP包裹胶囊，评价这种胶囊的体外释药性能。分别给大鼠口服各种DSP制剂，测定经时血药浓度和结肠组织中分布量，计算药物的相对靶向释药指数。用2，4，6一三硝基苯磺酸钠(TNBS)诱导大鼠结肠炎，建立髓过氧化酶活性(MPO)、Q一肿瘤坏死因子(TNF一。)、大鼠结肠重量与大鼠重量比值(C/B)和结肠损伤直观评分值(Score)4种反应结肠炎症程度指标的测定方法，观察口服各种DSP制剂对结肠炎症的治疗作用。结果: (1)在HPMCP保护下thG一CSF壳聚糖胶囊在人工胃液及人工小肠液中药物累积释放量8h内不大于20%;FS壳聚糖胶囊在人工胃液和人工小肠液介质中与rhG一CSF壳聚糖胶囊过程基本一样，而在人工大肠液介质中很快释放出来，在4h内基本释放完全;口服rhG一CSF壳聚糖胶囊能升高正常大鼠白细胞总数(BTL)，同时对CPA诱发的大鼠BTL降低具有恢复作用，加入SC能产生协同作用;口服rhG一CSF壳聚?