论文部分内容阅读
大黄,以其泻下作用著称,其作用快而强,被称为“将军”,发挥该效应的机制可能与其对结肠水代谢的调控而密切相关。近年来,随着人们对水通道蛋白(AQPs)的深入研究,发现该蛋白与体内水吸收、分泌有关,同时大量研究发现AQPs与大黄发挥泻下及利尿作用均显著相关。然而,AQPs是否与脓毒症后脑水肿形成有关,及其是否可成为大黄降低脓毒症后脑水肿的作用靶点,尚未见相关报道。中枢神经系统在脓毒症发展过程中极易受累,其重要机制之一是炎性因子的过度释放,造成难以逆转的脑实质细胞损伤,已有较多研究发现大黄在抗炎方面独领风骚,然而,中药大黄对此过程中脑组织炎症程度有无下调作用,值得探究。此外,相关文献报道脓毒症脑功能障碍的发生与血脑屏障通透性的增加密切相关,而血脑屏障通透性增加是产生脑水肿的重要机制之一,相关研究均提示大黄可改善脑损伤后血脑屏障通透性的增加程度。然而,大黄能否改善脓毒症后大鼠血脑屏障损伤程度,尚未见相关研究。针对以上问题,研究内容分为两部分第一部分:大黄对脓毒症相关大鼠脑功能障碍的作用机制研究目的探讨大黄对脓毒症大鼠脑功能障碍的影响方法84只Wistar大鼠随机分为盲肠结扎对照(sham)组(分A、B小组)、盲肠结扎穿孔术(CLP)组(分A、B小组)和大黄灌胃+CLP(R+CLP)组(分A、B小组)。R+CLP组给予溶有二甲基亚砜的大黄溶液经胃管灌胃,sham组和CLP组仅给予溶有二甲基亚砜的生理盐水灌胃,脓毒症大鼠模型采用盲肠穿孔结扎法(CLP)建立。观察A组大鼠生存时间。分别于术后6h、24h、48h处死B组大鼠。测血浆NSE、S100β含量(Elisa法),右脑组织用于光镜下观察病理改变(HE染色)、AQP-4表达情况(免疫组化法)、炎性因子表达水平(Elisa法),左脑测含水量(干湿重法)。结果CLP组和R+CLP组脑组织含水量较sham组明显增加,R+CLP组术后6h脑组织含水量较CLP组术后6h显著降低;CLP组和R+CLP组脑组织炎性因子(NF-ΚB、IL-6和TNF-a)水平较sham组明显升高,R+CLP组术后24h脑组织炎性因子水平较CLP组术后24h显著降低;CLP组和R+CLP组血NSE、S100β含量较sham组明显升高,R+CLP组术后24h血NSE、S100β含量较CLP组术后24h显著降低;光镜结果示R+CLP组脑组织水肿程度较CLP组减轻,尤以术后6h为著;脑组织免疫组化示R+CLP组阳性表达AQP-4的胶质细胞较CLP组明显减少,其中以术后6h最为明显;R+CLP组不同时间点生存率较CLP组明显提高。结论预使用大黄(Rhubarb,R)对大鼠脓毒症相关脑功能障碍有明显的保护作用。第二部分:大黄对脓毒症大鼠血脑屏障的影响目的观察中药大黄在脓毒症大鼠血脑屏障通透性中的作用,并探讨其可能的保护机制。方法Wister大鼠(n=24只)按随机数字表法分为对照(A)组、实验(B)组,每组12只。实验组给予溶有二甲基亚砜的大黄溶液(对照组给予含有二甲基亚砜溶液的生理盐水)灌胃3天后经腹腔行盲肠结扎法(CLP)制备脓毒症大鼠模型,术后24h行神经反射评分,经尾静脉注射伊文思蓝(EB)溶液,0.5h后,生理盐水经心脏灌洗。左侧脑组织用于测MMP-2、MMP-9、TIMP及Ⅳ型胶原蛋白含量。右侧脑组织用于测EB含量。结果B组比A组大鼠神经反射评分显著升高;B组脑组织中MMP-2、MMP-9含量较A组显著减少,而TIMP及Ⅳ型胶原蛋白较A组明显升高,且MMP-2、MMP-9、TIMP及Ⅳ型胶原蛋白三项指标相关性分析均显示显著相关。结论大黄可减少CLP术后24h脑组织MMP-2、MMP-9含量,增加TIMP及Ⅳ型胶原蛋白含量,降低血脑屏障通透性,提高大鼠神经行为学评分。