目的：通过单次颈静脉注射和多次尾静脉追加制作稳定嘌呤霉素氨基核苷(PAN)肾病大鼠模型,观察中药复方益气清热膏对慢性肾炎大量蛋白尿的药效学作用。方法：1.PAN肾病大鼠模型的制作：清洁级健康雄性Wistar大鼠15只,体重100±10g,随机分为4组：假手术组3只、PAN小剂量组(40mg/kg体重)6只、PAN大剂量组(55mg/kg体重)6只。颈静脉插管给相应剂量的PAN水溶液,假手术组给相同体积的生理盐水。分别于造模后的第13、16、19天尾静脉追加给PAN,剂量为0.5mg/kg体重,假手术组给等体积的生理盐水。分别于造模后的第0、4、8、12、15、19、24、28天检测各组大鼠24小时尿蛋白定量。于造模的第30天称重并处死动物,腹主动脉取血,取双侧肾组织。测量大鼠血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALb)、肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、胆固醇(CHO)及甘油三酯(TG)水平。计算并比较各组大鼠肾指数。过碘酸雪夫(PAS)染色比较各组大鼠肾组织病理改变。Western Blot和免疫组织化学法测定各组大鼠肾脏足细胞裂孔膜标志分子nephrin和podocin的分布情况。2.益气清热膏对PAN肾病模型大鼠肾小球滤过屏障影响的研究：取清洁级健康雄性Wistar大鼠30只,顺应性喂养一周后,随机分为假手术组、PAN肾病模型组、益气清热膏小剂量组、益气清热膏中剂量组、益气清热膏大剂量组、福辛普利钠组6组,每组各5只。颈静脉插管给PAN40mg/kg体重水溶液,假手术组给相同体积的生理盐水。分别于造模后的第13、16、19天尾静脉追加给PAN,剂量为0.5mg/kg体重,假手术组给等体积的生理盐水。分别于造模后的第0、5、10、15、20、25、30天检测各组大鼠24小时尿蛋白定量。于造模的第30天处死动物,腹主动脉取血,取双侧肾组织。测量大鼠血清TP、ALb、SCr、BUN、CHO及TG水平。计算并比较各组大鼠肾指数。PAS染色比较各组大鼠肾组织病理改变。和免疫组化法测定各组大鼠肾脏足细胞裂孔膜标志分子nephrin的分布情况。结果：1.PAN肾病大鼠模型的制作情况：55mg组在造模后第4天开始出现大量蛋白尿,第8天达高峰,第15天降至最低,随后又回升,处于不断波动中,未见明显变化规律。40mmg组于造模后第4天开始出现蛋白尿,第8天出现大量蛋白尿高峰,随后经历一个平台期,从第12天开始蛋白尿水平逐渐下降,尾静脉追加后于第15天出现蛋白尿缓慢下降的第二个平台期,至第30天蛋白尿水平降至最低,但仍高于正常。40mg尿蛋白高峰低于55mg组,且40mg组在尾静脉追加给药后能维持在一个相对较高的水平,蛋白尿的变化趋势比较平缓和稳定。在血清生化指标上,与对照组相比各造模组血清TP和ALb水平无明显变化。与对照组相比,40mg和55mg组血清CHO水平均有所升高,且55mg组升高大于40mg组,差异有统计学意义(P<0.05)。各组血清肌酐、尿素氮水平未见明显变化。光镜病理检查结果显示,与对照组相比,随着PAN剂量的增加肾小球系膜基质增生、基底膜增厚、小管上皮细胞空泡变性、远端小管管腔扩展、蛋白管型等病理改变逐渐加重,肾间质炎性细胞浸润和成纤维细胞增生改变加重,未见明显肾小球硬化。nephrin免疫组织化学染色结果显示,nephrin沿基底膜呈棕黄色线形分布,肾组织细胞核染成蓝色,随造模PAN剂量的逐渐增加,棕黄色线条逐渐减少,分布逐渐由线状变为接近颗粒状。Western Blot方法测定肾脏podocin表达量结果显示,与假手术组相比,40mg和55mg组podocin在肾脏的表达均有减少,二者相比无明显差异。2.益气清热膏对PAN肾病大鼠模型滤过屏障影响的研究结果：模型组及各药物干预组大鼠24小时蛋白定量于第5天开始升高,第10天达高峰,29天降至最低。其中第5天时各给药组24小时蛋白定量水平均低于模型组,第10天时小剂量组和蒙诺组低于模型组。肾指数结果显示对照组肾指数最小,除中药大剂量组外各组肾指数均小于模型组。血清学指标检测结果显示与模型组相比,中药中剂量、大剂量组及蒙诺组TG水平降低,P<0.05。血清肾功能及蛋白水平未见明显变化。病理分析结果显示与模型相比,中药小剂量、蒙诺组肾小球系膜基质增生、基底膜增厚、小管上皮细胞空泡变性、远端小管管腔扩展、蛋白管型等病理改变有明显减轻,肾间质纤维化和炎细胞的浸润有所减轻。各组均未见明显肾小球硬化。结论：通过单次颈静脉注射和多次尾静脉追加制作了稳定PAN肾病大鼠模型,并探索出了PAN的适合剂量为40mg/kg体重。该模型产生大量蛋白尿的机制可能为肾小球足细胞裂孔膜分子nephrin及podocin表达减少所致。中药复方益气清热膏有明显降低PAN模型尿蛋白水平的作用,其机制可能通过调节肾小球足细胞裂孔膜分子nephrin的表达,影响肾小球滤过屏障,减少血浆蛋白的漏出,从而降低尿蛋白水平。