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目的: 寻找一套适合重组基因工程抗体Anti-HBsAg Fab的分离纯化路线,为Anti-HBsAg Fab后期产业化生产奠定理论基础。 方法: 1.选择和验证阳离子交换介质(Streamline SP)从大肠杆菌中初步分离纯化Anti-HBsAg Fab最适吸附条件:利用试管法分别测定平衡缓冲液在不同pH和不同离子强度下阳离子交换介质Streamline SP对预分离纯化蛋白的吸附效果,分别用1mlSP预装柱及自装28ml Streamline SP柱进行离子交换层析以验证吸附效果。 2.选择及验证疏水作用层析初步纯化Anti-HBsAg Fab的适宜条件:利用1ml疏水介质预装柱试剂盒选择纯化Anti-HBsAg Fab的最佳疏水介质,确定疏水介质之后,利用1ml Phenyl Sepharose high sub疏水预装柱选择疏水作用层析的适宜纯化条件,最后,在小试规模的水平上验证疏水作用层析分离纯化Anti-HBsAg Fab的可行性。 3.小试规模非特异组合层析分离纯化基因工程抗体Anti-HBsAg Fab初步尝试:按实验设计的扩张柱床阳离子吸附层析——疏水作用层析——凝胶过滤层析非特异组合层析性纯化工艺路线分离纯化Anti-HBsAg Fab。 结果: 1.用阳离子交换介质(Streamline SP)从大肠杆菌中初步分离纯化