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伤口愈合是机体维持稳态的一个不可或缺的生理过程,其中炎症期对于伤口愈合过程至关重要。适度的炎症反应有助于清除细菌和细胞碎片,促进组织修复,而过度的炎症反应会导致伤口的难以愈合、组织坏死甚至多器官衰竭。长久以来科学家们研究的热点集中在微生物感染导致的炎症反应,而忽略了非微生物感染引发的过度炎症带来的危害。因此,对非感染伤口炎症机制的探究迫在眉睫。REG3A是一种多功能蛋白,虽然能够抑制胰腺炎、肠炎和角膜炎等炎症反应的发生,但对皮肤炎症的调节作用尚未有报道,其机制的研究更是空白。本课题首次发现除了已知的MyD88信号通路外,非依赖于接头分子MyD88的TLR3信号通路也能介导REG3A的表达,较于野生型小鼠伤口,TLR3基因敲除小鼠非感染伤口皮肤中RegⅢγ表达明显降低,并且在原代角质形成细胞中沉默TLR3受体后,poly(I:C)诱导的REG3A也明显变少。此外,小鼠背部皮间注射重组蛋白RegⅢγ后能够抑制非感染伤口TLR3依赖性炎症因子的产生,重组蛋白REG3A在原代角质形成细胞中也能够抑制poly(I:C)诱导的炎症因子的表达,表明REG3A对非感染伤口炎症的负调节功能。揭示了机体中存在的一种“稳态”机制,即TLR3的激活促进炎症反应的同时还会诱导抗炎蛋白REG3A的表达,防止过度炎症的发生。随后,我们详尽的探究了REG3A的抗炎机制。首先我们纯化得到不同结构域的REG3A蛋白与poly(I:C)共刺激角质形成细胞,发现REG3A的CTLD (C类凝集素结构域)是其发挥抗炎功能的主要片段。在角质形成细胞中通过抑制剂筛选发现TLR3主要通过激活JNK信号通路诱导炎症因子的产生,而REG3A正是通过抑制TLR3介导的JNK2的磷酸化从而发挥抗炎功能,小鼠在体实验也证明了这一点。为了进一步证明REG3A是如何发挥去磷酸化功能的,我们对REG3A刺激角质形成细胞样品进行检测,发现REG3A并不能诱导TLR下游负调节子A20、SARM或TRAF1的表达,却能够诱导负调节子SHP-1转录水平和蛋白水平的表达,并且小鼠背部皮间注射RegⅢγ也发现能够时间依赖性诱导SHP-1的表达。而REG3A主要是通过结合其受体EXTL3 (1-141aa)激活AKT-STAT3信号通路,从而诱导角质形成细胞中负调节子SHP-1的表达。将SHP-1基因沉默后,REG3A将不能够使JNK2去磷酸化及抑制TLR3介导的炎症反应,表明REG3A是通过诱导SHP-1的表达使TLR3介导的JNK2去磷酸化从而抑制炎症反应的产生。综上所述,我们的研究首次发现了TLR3信号通路的激活能够介导REG3A的表达,并且REG3A能够通过诱导负调节子SHP-1使JNK2去磷酸化从而抑制非感染伤口TLR3-依赖型炎症的过表达,详尽的证明了其中的调控机制,为防止非感染伤口的发炎提供了一种非抗生素治疗的新方法。