论文部分内容阅读
肿瘤潜在倍增时间(potential doubling time,Tpot)能较好反映疗中肿瘤干细胞的增殖能力。头颈部鳞癌的临床试验结果表明:疗前Tpot是影响头颈部鳞癌放疗效果的独立预后因素,是指导临床设计放疗分割模式的有用指标。因此本文应用HeLa细胞系、鼻咽鳞癌裸小鼠移植瘤模型和人体肿瘤活检及手术标本建立本实验室BUdR(bromoxyuridine,溴脱氧尿嘧啶核苷)标记BUdR/DNA双参数流式细胞仪(flow Cytometry,FCM)测定Tpot的方法;并试图建立适合我国国情的实体瘤离体BUdR标记的检测方法,探讨实体瘤离体标记法代替在体标记法的可能性,具体研究内容有: 1.从HeLa细胞系测定Tpot过程中,总结了有关BUdR配制,DNA变性、荧光染色及流式测定的步骤中的经验和需要注意的问题,并观察了BUdR标记的S期HeLa细胞的在细胞周期中的移动过程。 2.应用鼻咽癌裸小鼠移植瘤模型进行了BUdR在体标记双参数FCM测定Tpot的研究。比较了实体瘤标本不同的单细胞悬液制备方法,分析了在体BUdR标记时肿瘤体积及标本固定时间对测定的影响。 3 重点研究了用鼻咽癌裸小鼠移植瘤和直肠癌手术标本进行BUdR离体标记的技术,初步摸索出了在普通培养条件下BUdR离体标记的合适条件,即将标本用PBS洗净,剪成1~2mm3组织块直接置入含有20%胎牛血清RPMI 1640培养基、5%CO2、37℃、BUdR终浓度为的0.1mM、CO2孵箱中开放培养。