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益生菌在调节、改善和修复养殖生态环境、提高养殖动物生长速度以及增强水产动物抗病能力方面的应用研究已经非常多,而且益生菌的应用也得到了人们的广泛认可。目前,在众多益生菌中,芽孢杆菌(Bacillus)因其具有抗逆性强、生长迅速、易培养等优点,已被越来越多的关注和研究。大量研究表明,芽孢杆菌(Bacillus)具有较强的分解水体中的有机物、降解水体中的氨氮和亚硝氮以及硫化氢等有毒物质、促进水体中藻类生长以改善水质以及抑制水体中有害菌的生长从而提高养殖动物抗病能力等功效。由于添加的外源性菌制剂存在针对性和适应差等缺点,因此,分离和培养水产养殖环境中的优良芽孢杆菌,并对具有优良降解性能的芽孢杆菌进行驯化和优化,对水产养殖环境的优化和菌制剂的开发具有重要的理论意义。本研究从对虾养殖环境中分离芽孢杆菌,对芽孢杆菌的降解性能进行优化,旨在为对虾养殖环境的生物修复实践应用提供理论依据。研究获得的具体结果如下:1.对虾养殖池塘有益芽孢杆菌的富集驯化与分离筛选本研究在常温(28±1)℃下对对虾养殖池塘中的芽孢杆菌进行驯化和分离筛选。筛选所用指标主要为菌株对对虾饲料浸出液中的氮的利用能力,包括氨氮(NH4-N)和亚硝氮(NO2-N),最后得到5株降解菌(E1、E6、E13、E15、E21)。研究表明,分离自对虾池塘的各菌株对饵料中氮(NH4-N和NO2-N)的降解性能有所差异。其中E1、E6和E15对氨氮的降解效果较好,第5d时的去除率达到44.20%-48.20%;E1、E6、E15和E21均具有较高的亚硝氮降解效果,第5d亚硝氮的去除率均高达70.00%,其中以菌株E6和E15效果最好,E15在第5d时的亚硝氮去除率高达99.72%,而菌株E6则将饵料浸出液中的亚硝氮彻底去除(去除率为100%)。根据菌株对氨氮和亚硝氮降解的综合效果,筛选出4株降解菌(E1、E6、E15、E21)进一步研究。根据菌株的形态特征、生理生化特性以及16Sr DNA序列分析,E1、E6、E15、E21四株细菌均归属于芽孢杆菌属(Bacillus spp.),其中E1初步鉴定为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium),E6初步鉴定为短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus),E15初步鉴定为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)。2.一株益生芽孢杆菌降解特性研究本研究以菌株对对虾饵料中的氨氮和亚硝氮两种成分的降解利用效果为依据,对降解效果最好的菌株E6的特性进行了深入研究。研究显示,菌株E6具有较好的生长和降解特性。E6接种后(6-22h)内迅速生长,为生长对数期,至24h达到生长最大值。研究发现,菌株E6的降解动态过程显著,其中富集培养基中的氨氮含量在E6接种后的第2天达到最低值,去除率高达57.27﹪;富集培养基中亚硝氮的含量连续5d一直是降低的,其中在菌株培养至第4d时,富集培养基中的亚硝氮含量低至0.24mg/L,其对亚硝氮的去除率高达98.02﹪,培养至第5d时,菌株已将富集培养基中的亚硝氮彻底去除(去除率达100﹪)。进一步研究表明,菌株E6的生长适温为(24-36)℃,适宜盐度为(1-8)﹪,适宜pH7.0-9.0。菌株降解对虾饲料中的氨氮和亚硝氮的最适温度为(24-32)℃,最适盐度为(3-6)﹪,最适pH为7.5-8.0。3.几株益生芽孢杆菌的优化组合及降解特性研究本研究根据菌株对对虾饵料中的氨氮和亚硝氮去除率效果,对筛选自对虾养殖池塘的对氨氮和亚硝氮降解效果较好的芽孢杆菌进行了菌株以及初步的菌株优化组合的动态降解效果研究。单菌株动态降解效果研究结果表明,在降解饵料中的氨氮方面,四菌株(E1、E6、E15和E21)在培养后的第2d的去除率分别为50.90%、57.27%、46.77%和50.54%,具有较高的降解效果,此后的3d,去除率有所下降,除菌株E21外,其他3株菌的去除率仍高达40%以上,对饵料中的氨氮具有较好的去除效果。在降解亚硝氮方面,各菌株对饵料中的亚硝氮去除效果明显,其中菌株E15和E21在第3d的去除率分别高达97.78%和93.07%。菌株E6在第5d的亚硝氮的去除率高达100%,彻底去除了饵料中的亚硝氮。菌株优化组合研究方面,在氨氮降解方面,各组合降解效果差别不大,其中以组合E1-E6-E15-E21效果略好,在实验第2d去除率达54.79%,但各优化组合对饵料中的氨氮降解效果均低于最佳单菌株E6;在亚硝氮降解方面,以组合E1-E6-E15-E21降解效果最佳,在第2d去除率就高达100%,并保持此去除率到实验结束。