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近年来挖掘抗肿瘤基因资源和构建其肿瘤靶向工程菌,创新研究靶向工程菌治疗肿瘤新的技术途径越来越受到重视。本文根据人源肿瘤抑素和紫色杆菌来源基因序列合成和扩增了T7肽、19肽和抗菌肽AP1碱基序列以及以上三肽融合的基因片段,利用基因重组技术构建可溶性蛋白表达载体,将T7肽、19肽、AP1多肽和融合为三肽的基因片段分别克隆到两个含不同融合标签的原核表达载体pSmartⅠ、pSmartⅡ上,实现了 T7肽、19肽、AP1肽在E.coli BL(DE3)中的可溶性表达。通过Ni柱纯化T7肽、19肽和抗菌肽AP1,并作用于人宫颈癌Hela细胞、裸鼠黑色素瘤B16细胞和人肝癌7721细胞,研究其体外抗肿瘤细胞的活性。结果显示,T7肽对Hela细胞的活性最好。采用皮下注射建立了 Hela宫颈癌荷瘤裸鼠模型,将发酵培养的荧光素酶标记工程菌EcN Lux通过腹腔注射靶向运输至Hela宫颈癌组织低氧区域,采用小动物活体荧光成像系统进行示踪检测。结果表明,EcN Lux工程菌靶向集中在宫颈癌组织中,在裸鼠的肝脏、脾脏和肾脏组织中完全被清除掉,EcN工程菌靶向治疗对裸鼠的体重及主要免疫器官没有明显的影响,呈现出安全和无副作用。为了研究T7肽工程菌体内抗肿瘤活性,利用E.coli Nissle 1917(EcN)作为T7多肽靶向运输载体,通过重叠PCR将T7肽基因序列置于低氧启动子Pvhb下成功构建抗肿瘤靶向菌EcNT7工程菌。通过荷瘤裸鼠试验,对EcNT7工程菌抗肿瘤作用机制进行研究。利用免疫组化和免疫荧光技术,检测发现EcNT7工程菌处理组裸鼠宫颈癌组织区域中出现大量的浸润炎性细胞,且EcNT7工程菌起到促进肿瘤细胞凋亡和抑制肿瘤细胞增殖的作用,表明T7肽体内抗肿瘤活性高,能显著抑制荷裸鼠Hela宫颈癌的增殖。