【摘 要】
：
目的:RNA干扰是一种双链RNA进入细胞内而使特异基因表达抑制的进化保守的转录后基因沉默现象,目前RNA干扰已成为研究基因功能的重要方法。本研究旨在利用DNA载体在细胞内产生
论文部分内容阅读
目的:RNA干扰是一种双链RNA进入细胞内而使特异基因表达抑制的进化保守的转录后基因沉默现象,目前RNA干扰已成为研究基因功能的重要方法。本研究旨在利用DNA载体在细胞内产生短发夹状RNA,来诱导RNA干扰。本研究构建含多药耐药基因MDR1的短发夹状RNA（short hairpin RNA,shRNA）表达质粒,并观察其对肝癌耐药细胞Bel-7402/R的MDR1 mRNA的抑制作用。同时也为RNA干扰研究基因功能建立技术平台。 方法:根据Genebank中的MDR-1mRNA设计的两条反向重复多聚核苷酸序列,退火形成双链DNA,利用分子克隆技术,将含MDR-1的双链DNA,与经双酶切后的载体PGE-1连接,构建pshRNA-MDR1重组质粒,通过聚合酶链反应（PCR）和DNA测序证实了表达质粒构建成功;在脂质体的介导下转染肝癌耐药细胞株BEL-7402/R,逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）分析MDR-1 mRNA的表达,MTT法检测细胞对药物的敏感性,流式细胞仪（FCM）检测细胞内罗丹明123（Rh123）的潴留和P-gP的表达。 结果:PCR和DNA测序证实了含多药耐药基因MDR-1的短发夹状RNA表达质粒构建成功,转染肝癌耐药细胞Bel-7402/R后能明显地抑制其MDR-1 mRNA的表达,P<0.05;对阿霉素和顺铂的半数抑制率IC50明显降低,P<0.05;P-gP的表达阳性率降低了57.3%;细胞内Rh123的浓度显著增高,P<0.05。 结论:成功地构建了重组质粒pshRNA-MDR1,该质粒能有效地降低肝癌耐药细胞MDR-1 mRNA的表达,有望消除P-gP的作用,为逆转其引起的MDR的基因治疗提供实验基础,开创一条新途径。
其他文献
目的 探讨肺泡灌洗术联合纤维支气管镜在老年慢性阻塞性肺疾病（COPD）合并肺癌中的诊断与治疗。方法 将109例老年COPD合并肺癌患者随机分为2组,治疗组56例,使用纤维支气管镜肺泡
本设计立足于“云布谣”品牌的援疆项目,旨在依托新疆现有的壁挂自己原材料市场对新疆壁挂进行创新提升。新疆作为“一带一路”建设中的重要省份,在我国壁挂市场中具有举足轻
小分子荧光探针因其具有灵敏度高、选择性好、高通量快速筛选等特点在诸多领域得到广泛应用,比如检测生物酶活性、重金属离子、小分子化合物等。特别是近些年来,近红外荧光探
对改进前后两种低热值煤层气燃烧器进行了全尺寸的三维数值模拟,给出了两种燃烧器速度场、温度场和浓度场的分布情况,结果表明,改进后的燃烧器在产生中心回流区和外回流区的
“互联网+”作为一种全新的思维理念,正无孔不入地影响着经济社会发展的方方面面,同样也给公文写作教学带来了新的机遇和挑战。借助“互联网+”来构建传统公文写作教育与现代
氮氧化物污染问题越来越受到人们的重视。作为能源行业的现阶段甚至未来很长时间段内的支柱产业,燃煤电厂是氮氧化物的主要污染源之一。虽然以SCR脱硝和低氮燃烧为主的燃煤电站氮氧化物控制技术种类丰富且应用广泛,但在实际应用中依然会存在诸如氨氮混合不均、积灰堵塞严重、脱硝效率低于理论值等问题。本文分别以某SCR反应器内喷氨格栅和某电厂SCR反应系统为研究对象,利用计算机数值模拟结合实际运行中存在的问题对喷氨
安全法规的探索与应用刘国财（抚顺市矿务局供电部，１１３００８）钟忻（抚顺市煤校，１１３００８）１什么是安全法规安全法规，是人们在长期生产实践中，通过总结安全生产经验和吸取事故教训，在认识了生产规律、事故规
目的:通过对32例鼻内翻性乳头状瘤病历的回顾性分析讨论与鼻内翻性乳头状瘤复发相关的因素。方法:经病理诊断为鼻内翻性乳头状瘤的患者32例,其中有6例伴有不典型增生,按Krous
目的：分析角膜塑形镜对于青少年近视的治疗效果与护理。方法：随机选取2015年4月-2016年6月的120例（240眼）青少年近视病例,给予角膜塑形镜治疗,同时对其给予相应的护理措施。在治
近年来,随着中国铁路网的不断加密、扩大,越来越多的铁路线路需要穿过人类活动频繁的区域,并且存在公路和铁路相互交叉的线路,在铁路桥梁桩基附近难免会存在建筑物和堆土静载,以及车辆动荷载,这些荷载的存在会对桥梁桩基产生不利影响,造成桥梁桩基的下沉和倾斜,严重时,会影响上部线路的行车安全。所以开展地表堆载对既有桥梁桩基受力特性的影响研究具有重要的现实工程意义。本文依托郑徐(郑州-徐州)高速铁路一特大桥桥梁