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中草药有效成分快速高效分离和纯化制备是生产制备中药标准品、对照品生产的核心，也是中药质量控制和中药现代化的重要组成部分。传统的以溶剂提取结合柱色谱提取纯化制备中草药有效成分标准品或对照品的方法因步骤繁琐、周期长、效率较低而无法满足中药现代化生产和质量控制的需要。本论文结合微波辅助提取(MAE)和加速溶剂提取(ASE)方法具有快速高效的特点，以及高速逆流色谱(HSCCC)具有制备量大、回收率高的优势，研究了MAE/HSCCC和ASE/HSCCC方法，直接从岩黄连、朱砂根、肿节风和石吊兰等中草药中分离纯化得到了高纯度的有效成分对照品，并采用HPLC、MS和1H NMR等技术表征了有效成分对照品的纯度和结构。主要研究内容如下：
1.综述了中草药有效成分提取和分离技术的研究进展，重点介绍了微波辅助提取技术、加速溶剂提取技术和高速逆流色谱技术在中草药有效成分提取分离纯化中的应用进展。
2.开展了MAE/HSCCC联用分离制备中草药有效成分的研究。采用MAE提取、粗提液浓缩后直接进入HSCCC分离纯化，建立了分别从岩黄连和朱砂根中直接分离纯化脱氢卡维丁和岩白菜素对照品的MAE/HSCCC联用方法。
(1)建立了直接从岩黄连药材中分离纯化脱氢卡维丁的MAE/HSCCC联用方法，并采用HPLC、MS和1H NMR分析表征了纯化得到的脱氢卡维丁对照品。通过正交试验优化了MAE提取条件，得到MAE最优条件为：提取温度60℃、液固比20 mL/g、提取时间15 min和微波功率700 W。优化得到脱氢卡维丁的HSCCC分离条件为：以氯仿-甲醇-0.5 mol/LHC1(4∶0.5∶2，v/v/v)为两相溶剂体系，上相为固定相，下相为流动相，转速为800 rpm，流速为2 mL/min，最大进样量900 mg粗提物。采用该MAE/HSCCC联用方法可一次直接从6 g岩黄连药材中分离纯化得到纯度为98.9％的脱氢卡维丁42 mg，总耗时4 h。实现3次连续进样过程，从2700 mg粗提物中共制备纯度超过98％的脱氢卡维丁122.1 mg，总耗时约12 h。
(2)建立了直接从朱砂根、岩陀和落新妇中分离纯化岩白菜素的MAE/HSCCC联用方法，并采用HPLC、MS和1H NMR分析表征了其纯度和结构。通过正交试验优化了MAE提取条件，得到朱砂根的最优条件为：提取温度60℃，液固比10 mL/g，提取时间15 min和甲醇浓度60％(v/v)；岩陀的最佳条件为：提取温度50℃、液固比15 mL/g、提取时间5 min和甲醇浓度60％(v/v)；落新妇的最优条件为：提取温度50℃、液固比10 mL/g、提取时间5 min和甲醇浓度60％(v/v)。比较研究了MAE和索氏提取法(SE)提取岩白菜素的提取率，MAE使用提取溶剂量少且对中草药有效成分提取效率较高。优化的岩白菜素的HSCCC分离条件为：以乙酸乙酯-正丁醇-水(3∶2∶5，v/v/v)为溶剂体系，上相为固定相，下相为流动相，转速900rpm，流速2 mL/min，一次最大进样量进样160 mg粗提物。采用该MAE/HSCCC联用方法可一次直接从160 mg朱砂根、160 mg岩陀和160 mg落新妇分别分离纯化得到纯度为99％的岩白菜素18.6，25.0和8.4 mg，总耗时3 h。
3.开展了ASE/HSCCC联用方法分离制备中草药有效成分的研究。以肿节风中异秦皮啶和石吊兰中石吊兰素为对象评价了MAE/HSCCC联用方法的可行性。
(1)建立了ASE/HSCCC联用直接分离纯化肿节风中异秦皮啶的方法，采用HPLC、MS和1H NMR分析表征了异秦皮啶的纯度和结构。以HSCCC溶剂体系下相为提取溶剂，通过正交试验优化的ASE的提取条件为：提取80℃、提取时间15 min、压力为10 MPa和静态循环1次。将肿节风的ASE粗提液以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(1∶2∶1∶2，v/v/v/v)为溶剂体系，上相为固定相，下相为流动相，在转速800 rpm，流速2 mL/min条件下采用HSCCC分离纯化，可直接从1.0 g原样中一次分离得到纯度大于99％异秦皮啶0.48 mg，总耗时2.5 h。实现4次连续进样过程，从4.0 g原样中共制备1.94 mg异秦皮啶，总耗时约在9 h。
(2)建立了ASE/HSCCC联用直接分离纯化石吊兰中石吊兰素的方法。通过正交试验优化的最优ASE条件为：提取温度120℃，压力6 MPa，提取时间10 min。将肿节风的ASE粗提液以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(7∶3∶5∶5，v/v/v/v)为溶剂体系，上相为固定相，下相为流动相，转速800 rpm，流速2 mL/min条件下采用HSCCC分离纯化，可直接从1.0 g原样粗提液中一次分离得到纯度大于99％石吊兰素2.40 mg，总耗时2 h。实现4次连续进样过程，从4.0 g原样粗提液共制备纯度大于99％的石吊兰素9.50 mg，总耗时小于7 h。