谷胱甘肽(L-Glutathione)是一种广泛分布在活的生物体细胞中的三肽,其活性巯基能抓取自由基,通过转化成氧化性谷胱甘肽,从而起到保护机体的作用。谷胱甘肽对治疗肝脏疾病、癌症、甚至艾滋病等都有一定的效果。谷胱甘肽还在食品加工,化妆品等领域得到广泛的应用。谷胱甘肽的生产方法有多种,现在以发酵法作为最主要的生产方法。通过微生物发酵产生谷胱甘肽,而后经过提纯得到产品谷胱甘肽。天然菌种中的谷胱甘肽含量普遍不高。通常采用诱变育种的方法可以得到高产菌种。然后经优化发酵生产的条件,达到提高产量的目的。近些年来,随着分子生物学的发展应用,通过转基因的方法提高谷胱甘肽的产量已经成为一种趋势。谷胱甘肽合成酶基因是两段不含有内含子的基因。这个条件使得对谷胱甘肽的深入研究成为了可能。本课题首先优化了谷胱甘肽的检测定方法,找到了一种快速、简便、稳定的,符合本实验室应用的检测方法。与此同时,从活性干酵母中筛选到了一株相对高产菌,并对其进行了紫外诱变育种,得到了一株诱变高产谷胱甘肽菌株,并扩增得到了谷胱甘肽合成酶基因。此外还对这株高产菌株进行了形态学以及生理生化鉴定。主要研究结果如下:1细胞中谷胱甘肽含量的测定方法:发酵液在10000rpm下,4°C冷冻离心得上清液,为待测液,3 ml分析样品,4.5 ml 1%的Na2MOO4溶液,0.3 ml的1mol/L的H2SO4 ,1.5 ml 0.5%的(NH4)2HPO4,5.7 ml超纯水,摇匀,沸水浴40 min,用冷流水冷却到室温。测定在波长710nm处测定光吸收值。2从安琪酵母中筛菌得到高产菌,经过紫外诱变育种得到诱变高产菌种。谷胱甘肽产量占菌体干重已经达到了17.05mg/g。谷胱甘肽产量比出发菌株的谷胱甘肽产量提高了61.3%。3经过形态学和生化鉴定,该高产菌种属于,酿酒酵母菌。4用试剂盒提取到该菌株的基因组DNA。5扩增得到了谷胱甘肽合成关键酶的基因,测序得到一段长2024的序列,并分析。