论文部分内容阅读
背景和目的:炎症性肠病（Inflammatory bowel disease,IBD）是一组临床常见的慢性非特异性肠道炎性疾病,但目前临床常用治疗手段疗效不佳,多数患者反复发作,迁延不愈,严重影响患者的生活质量。既往研究发现下丘脑-垂体-肾上腺轴（The hypothalamic–pituitary–adrenal axis,HPA axis）在“脑-肠”相互作用中发挥重要作用,炎症性肠病发展过程中“脑-肠”相互作用发生改变,驱动了HPA轴,进而影响肠道炎症。GPER1（G protein-coupled estrogen receptor 1）是一种新型跨膜雌激素受体,既往关于GPER1与IBD的研究较少。目前已知下丘脑室旁核（Paraventricular nucleus of hypothalamus,PVN）神经元负责调控HPA轴活动,且研究证实GPER1在PVN区高量表达,但PVN区神经元表达的GPER1受体在炎症性肠病中的调节作用仍不明确。在外周肠道发生炎症刺激时,中枢神经系统是如何发挥调控作用,对炎症性肠病产生加重或保护作用也是未知的。因此本文深入研究了PVN区神经元GPER1受体在葡聚糖硫酸钠（Dextran sulfate sodium,DSS）诱导的炎症性肠病早期阶段的变化以及其对肠道炎症发挥的作用。方法:（1）运用DSS饮水建立小鼠炎症性肠病模型,称量小鼠体重变化;通过HE染色法观察小鼠结直肠组织病理形态变化;采用Real-time PCR技术检测小鼠结直肠组织中IL-6和IFN-γ炎症因子改变;使用ELISA法检测小鼠血清IL-6表达。（2）采用免疫荧光染色技术明确炎症性肠病早期阶段大鼠PVN区神经元c-Fos激活、GPER1受体表达以及两者的共标比例;运用Western Blot技术检测IBD造模前后PVN区GPER1受体表达水平。（3）构建了GPER1-/-小鼠,比较GPER1-/-型和野生型小鼠炎症性肠病造模后肠道炎症程度;构建了针对GPER1-shRNA的腺相关病毒（Adeno-associated virus,AAV）,通过立体定位注射局部干扰小鼠PVN区GPER1受体表达,比较对照组和GPER1-shRNA干扰组炎症性肠病造模后肠道炎症程度;采用结直肠充胀扩张（Colorectal distension,CRD）和腹壁回缩反射（Abdominal withdrawal reflex,AWR）评分来评估小鼠内脏痛的严重程度。结果:（1）DSS可成功诱导小鼠炎症性肠病的状态。与正常饮水组相比,DSS造模组表现为体重明显降低,结直肠组织大量炎细胞浸润,显著充胀水肿,结构破坏,IL-6和IFN-γ等炎症因子明显升高,血清中IL-6也显著升高。（2）PVN区神经元可在炎症性肠病早期阶段活化且大部分为GPER1阳性神经元。与正常饮水组相比,DSS造模3天组PVN区神经元c-Fos表达明显增加,GPER1表达显著增加,两者共标比例明显增加。（3）全身GPER1基因敲除以及PVN区GPER1局部敲除均可加重小鼠肠道炎症程度,但对内脏痛严重程度作用较弱。DSS造模1周后,与野生型小鼠相比,GPER1-/-小鼠肠道炎症程度明显加重,体重下降更为显著,生存率大大降低。局部干扰PVN区GPER1受体表达同样加重了肠道炎症程度。GPER1-/-小鼠、PVN区GPER1局部敲除小鼠与野生型小鼠的AWR评分无明显差异。结论:PVN区GPER1阳性神经元可在DSS诱导的炎症性肠病早期阶段被激活,且具有保护作用,这可能是中枢神经系统调控外周肠道炎症以实现自我保护的重要机制,以及为IBD的临床治疗提供新的靶点。