[目的]：　　研究芹菜素对人骨髓间充质干细胞成骨分化的影响，观察其药理学效应;进一步阐明JNK和p38 MAPK信号通路在芹菜素对体外培养的人骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的作用。　　[方法]：　　1、体外培养人骨髓间充质干细胞，给予成骨分化诱导液，观察细胞增殖和分化情况，应用碱性磷酸酶染色和茜素红染色检测人骨髓间充质干细胞成骨细胞分化的过程。　　2、根据不同浓度芹菜素处理分组:α-MEM（间充质干细胞培养基）培养基阴性对照组（无细胞），0μM芹菜素α-MEM培养处理组，0.1μM芹菜素α-MEM培养处理组，1μM芹菜素α-MEM培养处理组，5μM芹菜素α-MEM培养处理组，10μM芹菜素α-MEM培养处理组。MTT法检测各组细胞在培养1天，2天，3天，7天，14天的细胞活力，重复3次独立实验。　　3、在诱导培养的第7天进行碱性磷酸酶染色，以检测芹菜素对人骨髓间充质干细胞成骨分化作用，在第14天进行茜素红染色，以检测各组细胞成骨分化过程中的矿化状况，重复3次独立实验。　　4、应用Real time-PCR方法检测芹菜素对人骨髓间充质干细胞成骨分化过程中转录因子Runx2和OPN基因表达水平，重复3次独立实验。　　5、以最佳促成骨分化浓度芹菜素和不同的通路抑制剂对人骨髓间充质干细胞进行干预，实验分组为:0μM芹菜素α-MEM培养处理组，5μM芹菜素α-MEM培养处理组，SB203580α-MEM培养处理组，SP600125α-MEM培养处理组，5μM芹菜素+ SB203580α-MEM培养处理组，5μM芹菜素+SP600125α-MEM培养处理组，以下实验均重复3次。　　(1)先给予各通路抑制剂干预芹菜素的诱导作用，再应用碱性磷酸酶染色和茜素红染色检测人骨髓间充质干细胞成骨细胞分化的过程，分析通路抑制剂是否影响芹菜素对人骨髓间充质干细胞的促成骨分化和矿化作用。　　(2)应用Real time-PCR检测Runx2和OPN基因表达水平。　　(3) Western blotting技术检测JNK和p38 MAPK信号通路磷酸化表达水平。　　(4) Western blotting技术检测Runx2和OSX蛋白表达水平。　　[结果]：　　1、人骨髓间充质干细胞在成骨分化诱导液作用下表现出成骨细胞特性，碱性磷酸酶染色阳性、茜素红染色可见特征性钙结节形成。　　2、芹菜素浓度在0.1μM-10μM范围内，对人骨髓间充质干细胞无明显增殖作用。　　3、0.1μM-5μM芹菜素促进人骨髓间充质干细胞的成骨分化过程:　　(1)芹菜素促人骨髓间充质干细胞的成骨分化过程，表现为碱性磷酸酶染色阳性，并呈剂量依赖性增加细胞碱性磷酸酶活性(p＜0.05)。　　(2)芹菜素可剂量依赖性增加人骨髓间充质干细胞钙结节形成(p＜0.05)。　　(3)在人骨髓间充质干细胞成骨分化过程中，Real time-PCR检测结果显示芹菜素可上调转录因子Runx2和OPN基因表达（p＜0.05）。　　4、抑制剂SP600125和SB203580可阻断芹菜素对人骨髓间充质干细胞成骨分化作用:　　(1)抑制剂SP600125和SB203580组与药物组比较，碱性磷酸酶染色和茜素红染色均减少，抑制剂SP600125和SB203580组碱性磷酸酶活性较药物组显著降低(p＜0.05)。　　(2) Real time-PCR检测显示抑制剂SP600125和SB203580组Runx2和OPN基因表达较药物组显著降低（p＜0.05）。　　(3) Western blot分析JNK和p38信号通路磷酸化表达水平，发现芹菜素可使磷酸化JNK和磷酸化p38水平升高(p＜0.05，p＜0.01);抑制剂SP600125和SB203580可阻断芹菜素对磷酸化JNK和磷酸化p38升高作用(p＜0.01）。　　(4) Western blot分析转录因子Runx2和OSX蛋白的表达水平，发现抑制剂SP600125和SB203580组Runx2和OSX蛋白表达较药物组显著下降(p＜0.05)。　　[结论]：　　1、芹菜素对人骨髓间充质干细胞有促成骨分化作用。　　2、JNK和p38 MAPK信号通路参与芹菜素对人骨髓间充质干细胞的成骨分化作用，其作用可能与上调转录因子Runx2和OSX的表达有关。