谷胱甘肽对多脏器功能障综合征患者内皮细胞氧化应激影响的实验研究

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目的探讨多器官功能障碍综合征(MODS)患者血清对人脐静脉内皮细胞功能的影响,研究抗氧化剂谷胱甘肽对人脐静脉内皮细胞功能的作用,阐明外源性谷胱甘肽对内皮细胞氧化损伤的保护作用。方法纳入符合MODS诊断标准的患者,入科后24h内抽取血样离心后血清-80℃冰箱保存,同时记录患者基本资料,评价生化指标、动脉血气分析、APACHE Ⅱ评分、SOFA评分、28天死亡率等指标。培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),细胞实验分为4组:空白对照组、血清处理组、N-乙酰半胱氨酸(NAC)对照组、GSH治疗组(6mg/ml、12mg/ml、18mg/ml)。采用酶化学法测定细胞超氧化歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化氢酶(GSH-px)、总抗氧化能力(T-AOC)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)等水平。以氯甲基二氯二氢荧光素二乙酯(CM2-H2DCFDA)染色后,流式细胞仪立即检测CM2-H2DCFDA氧化产物二氯荧光素的平均荧光强度测定细胞内活性氧(ROS)强度,MTT法检测各组细胞活力。各测量值用均数±标准差(X±s)表示,应用SPSS16.0统计分析软件对数据进行分析,两组间的均数比较采用t检验,多组间均数的比较采用q检验,以p<0.05表示差异有统计学意义。结果共纳入20位MODS患者,其中存活组12例,死亡组8例。死亡组患者年龄、APACHE Ⅱ评分、SOFA评分明显高于存活组。存活组患者白蛋白、动脉血氧分压(PO2)和氧和指数(PO2/FiO2)高于死亡组,而死亡组患者的肌酐、尿素氮、动脉血乳酸均明显高于成活组。细胞实验发现,MODS患者血清处理后的内皮细胞SOD、GSH-px、T-AOC、CAT水平均低于空白对照组,给予不同浓度的GSH预处理后再利用MODS患者血清处理后的内皮细胞的SOD、GSH-px、T-AOC、CAT水平与单纯血清处理组相比明显增高。MODS患者血清处理后的内皮细胞ROS、MDA水平明显增加,而GSH治疗组的ROS、MDA水平低于血清处理组。另外,MTT测定细胞活性结果显示,血清处理组的细胞活性明显低于正常对照组,GSH预处理后细胞活性增加。结论多脏器功能障碍综合征患者内皮细胞功能受到一定的抑制,谷胱甘肽可通过增强细胞抗氧化能力、减少自由基生成、抑制脂质过氧化反应以及增强细胞活性等机制起到保护作用。
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