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苦荞(Fagopyrm tatarium)是蓼科荞麦属的药食兼用作物,是荞麦的一个栽培种。苦荞中富含黄酮类化合物,苯丙氨酸解氨酶(PAL)是苦荞黄酮合成途径中的第一个酶,研究其基因的多样性可为挑选高黄酮优质苦荞种质资源奠定基础。 根据Genbank网站中公布的苦荞苯丙氨酸解氨酶的基因序列,设计3对引物, PCR扩增67份苦荞材料PAL基因序列,对其进行多样性分析。结果表明:供试的67份苦荞材料的PAL基因序列长度为2011 bp,其中,变异位点为160个,占序列总长度的7.9%,简约信息位点为33个,占序列总长度的1.64%。利用软件比对材料的苯丙氨酸解氨酶基因序列,共检测到46个 SNP,频率为1SNP/43.7bp。在PAL基因单核苷酸变异中,发生转换是23个,颠换是23个。转换与颠换的比值为1:1。 分析各地区苦荞种质资源的遗传多样性中,不同来源的苦荞材料间的遗传距离分布于0.002-0.016之间,来源于四川组的苦荞材料种内平均遗传距离最大(0.016),内蒙古组的最小(0.002)。四川地区的材料与其它地区来源的材料间的遗传距离位于0.010-0.014之间,而其他地区间的遗传距离为0.004-0.013。67份苦荞材料的平均π值和θ值分别为0.0034和0.0143。其中,四川材料的π值为0.0148。依据遗传距离及分析核苷酸多样性,均发现四川地区的苦荞存在丰富的遗传多样性,这可能与中国西南部地区作为苦荞起源地具有一定的关联性。 依据PAL序列构建系统发育树:本研究通过邻接法构建系统发育树,将67份苦荞种质资源分为7组,这些聚类结果显示多数的苦荞材料PAL序列之间差异较小,分类与地理来源没有关系。仅西藏地区的5份材料单独聚为一组,比对结果发现其材料中具有较多的碱基转换与碱基颠换的情况,说明西藏的材料中可能是苦荞PAL基因中稀有的SNP,是该基因中新的突变位点。 苦荞已经成为公认的健康食品。尤其含有丰富的黄酮类化合物,对糖尿病及其并发症有重要的防治效益。本研究以BSA-GO反应体系模拟体外非酶糖基化反应,比较荞麦提取物和芦丁、槲皮素、异槲皮素等黄酮类化合物对非酶糖基化终产物AGEs的抑制效果。结果证明:抑制效果为荞麦2#醇提物>荞麦1#醇提物>盐酸二甲双胍>荞麦水提物。抑制率最高的是荞麦2#醇提物,且荞麦醇提取物对AGEs的抑制作用与三种黄酮类化合物(芦丁、槲皮素和异槲皮素)无明显差异。由此可知荞麦的乙醇提取物抑制AGEs形成的能力远高于市售的盐酸二甲双胍药物,有望开发出一种高效、无毒副作用的降糖药物,或作为一种食品添加剂用于糖尿病人的专用食品中,提高荞麦的利用价值。