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目的:本研究应用双向荧光差异凝胶电泳(two-dimensional fluorescence difference gel electrophoresis简称2-D DIGE)和液相色谱质谱联用(Liquid chromat ography masss pectrometry简称LC-MS/MS)方法,研究小细胞肺癌患者与健康对照者血浆蛋白质组表达的差异;寻找并鉴定与小细胞肺癌癌变相关的蛋白。方法:以小细胞肺癌患者及健康者血浆为研究对象,应用Extract Albumin/IgG Removal Kit,2D Clean-up Kit试剂盒,对血浆样品进行预处理;采用双向荧光差异凝胶电泳实验方法,对其各组样品进行荧光标记后,行一向固相梯度等电聚焦电泳(Isoelectric focusing简称IEF)和二向SDS聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳(Polyaerylamide gel electrophoresis简称SDS-PAGE);应用Typhoon9400激光扫描仪成像,得到不同通道的蛋白质组图;采用DeCyder6.5软件进行分析,找到其具有统计学意义的差异蛋白点;应用液相色谱质谱(LC-MS/MS)获得肽质量指纹图;通过搜索NCBIpro蛋白质数据库,鉴定与肿瘤相关蛋白质。结果:1采用优化的双向荧光差异凝胶电泳技术获得了重复性良好的小细胞肺癌患者和健康者的血浆蛋白质2-D DIGE图谱;结合Decyder6.5分析软件,发现具有统计学差异(P<0.05)的蛋白点共有147个,选取85个蛋白点行质谱鉴定,其中在小细胞肺癌中上调的蛋白点有16个(334、324、431、443、446、451、465、488、517、695、696、740、768、966、970、971),443、465可找到相匹配的蛋白;下调蛋白点有25个(178、179、248、253、257、258、390、400、515、527、548、569、570、571、572、574、576、577、578、581、585、594、596、604、880),178、179、248、257、400、515、572、585可找到其相匹配的蛋白,其它的蛋白点均为未知蛋白质。2经过NCBIpro蛋白质数据库检索分析,根据其分子量、等电点及得分,鉴定其下调蛋白部分为:Alpha-2-macroglobulin,Pregnancy zoneprotein;Complement C3,Ceruloplasmin;Serotransferrin,Hemopexim,Ig gamma-3 chain C,haptoglobin等;鉴定其上调蛋白为:Complement C9,Angiotensinogen;目前尚存在一些蛋白点在蛋白数据库中未找到其相匹配的蛋白质,由于双向凝胶电泳的分辨力,或质谱分析敏感性的限制,以及部分蛋白质可能是未发现的新蛋白,有待进一步研究。结论:1应用双向荧光差异凝胶电泳联合液相色谱质谱技术成功的筛选并鉴定出了小细胞肺癌患者和健康人血浆差异蛋白质;通过研究一些急性期蛋白质如:Serotransferrin,haptoglobin与肿瘤相关,但具体机制尚不明确,有待于进一步研究探讨。2 2D-DIGE改善了传统2-DE重复性较差的缺点,减少了操作环节,为推动血浆的定量蛋白质组研究之提供了更有力的技术支撑。