枣果实糖积累和代谢酶活性变化及其基因表达的研究

来源 :塔里木大学 | 被引量 : 12次 | 上传用户:sda_xiangwei
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果实中糖的组分及含量是决定果实品质的重要指标,而果实糖分的代谢过程极其复杂,受多种酶共同调节。为了了解枣果实糖分积累规律和主要作用酶及相关基因之间的关系,本文以制干品种骏枣和鲜食品种冬枣为试材,利用HPLC-ELSD法对枣果实发育过程中的糖组分及含量进行了检测和分析,研究了枣果实中蔗糖代谢相关酶(转化酶、蔗糖磷酸合成酶、蔗糖合成酶)的活性变化规律,通过实时荧光定量PCR技术对枣果实中蔗糖代谢相关酶基因的转录水平进行了动态分析,主要研究结果如下:1、HPLC-ELSD法测定枣果实中可溶性糖的色谱条件:Waters XBridgeTM Amide(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,柱温为30℃,流动相为0.2%三乙胺的超纯水和0.2%三乙胺的乙腈,流动相比例为24:76(v/v),雾化管温度为60℃,漂移管温度为60℃,气流量为1.6 L/min,增益值为1.0;利用HPLC-ELSD法对成熟期枣果实中可溶性糖进行检测,检测出糖分有葡萄糖、果糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖、阿拉伯糖和鼠李糖,骏枣果实中未检测到鼠李糖;骏枣和冬枣果实中可溶性糖组分主要为蔗糖、葡萄糖和果糖,骏枣和冬枣属于蔗糖积累型果实。2、枣果实发育初期糖含量较低,主要积累的糖分为葡萄糖和果糖,进入成熟期后蔗糖开始大量积累,至采收时达到最高值,骏枣为27.34%、冬枣为31.82%;在整果实发育期内葡萄糖和果糖含量变化不大;冬枣蔗糖及总糖含量一直大于骏枣。3、枣果实发育初期,酸性转化酶(AI)、中性转化酶(NI)和蔗糖合成酶分解方向(SS-c)活性都比较高,而蔗糖磷酸合成酶(SPS)和蔗糖合成酶合成方向(SS-s)活性较低,以蔗糖分解代谢为主;随着果实的生长发育,SPS和SS-s活性升高,AI、NI和SS-c活性降低,以蔗糖合成代谢为主。在整个果实发育期,蔗糖含量与SPS和SS-s呈极显著正相关。4、对1个AI基因的表达分析表明,AI相对表达量与果糖和葡萄糖含量间没有明显的关系,而与酶活性间表现出对应的规律性,表明AI对调控枣果实内的己糖平衡具有重要作用;5个NI基因的表达分析结果显示NI1在枣果实发育过程中的表达水平最高,NI4表达水平最低,NI2仅在幼果期大量表达,NI5与酶活性变化趋势较一致;冬枣和骏枣果实中NI3和NI4的基因表达丰度的变化趋势相似,表明枣果实发育过程的中性转化酶活性同时受到这5个NI基因家族成员的影响;3个SS基因的表达分析结果显示,3个蔗糖合成酶基因家族成员相对表达量存在极大的差异,SS1基因的表达水平极低,与SS-c活性变化趋势较一致,SS2与SS-s活性变化趋势较一致,SS3仅在冬枣果实发育后期大量表达,由此推测SS3可能在冬枣果实中起重要作用,3个SS基因家族成员可能共同调节枣果实中的糖分代谢;4个SPS基因的表达分析结果显示,4个SPS基因家族基因表达量峰值出现的时间早于蔗糖含量峰值出现的时间,不同枣果实中SPS基因的表达存在差异,SPS1和SPS2相对表达量较低,SPS3在骏枣果实发育后期大量表达,SPS4在冬枣果实发育后期大量表达,推测SPS3对骏枣果实发育过程中糖分积累的调控作用较强,SPS4对冬枣果实发育过程中糖分积累的调控作用较强。
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