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目的：⑴确定CK2α在肺癌组织及癌旁肺组织中的表达特性。⑵构建与绿色荧光蛋白融合表达的pSilencerTM4.1/shCK2α慢病毒干扰载体，建立稳定干扰CK2α的肺癌细胞株A549。⑶探讨干扰CK2α对肺癌细胞株A549生物学特性的影响，从整体上研究CK2α在肺癌中的凋亡机制，为进一步研究CK2α对肺癌可能的作用机制奠定理论基础。
方法：①采用免疫组织化学SP法和Western blot检测CK2α在临床肺癌组织标本及癌旁肺组织中的表达，并进行后续实验。②利用针对CK2α基因设计的shRNA序列，获得CK2α干扰片段，构建与绿色荧光蛋白(green fluorescent protein，GFP)融合表达的CK2α慢病毒载体，将慢病毒载体质粒与辅助质粒共转染293FT细胞包装慢病毒，收集病毒上清液，进行病毒滴度测定，将含CK2α特异干扰片段的慢病毒感染A549细胞，以空载体的病毒为阴性对照，利用GFP的表达用流式细胞仪筛选出两株稳定干扰CK2α基因的肺癌细胞株。命名为实验组（分别缩写为sh870、sh1028）;对照细胞株命名为病毒空白对照组（缩写为NC）;同时以未做任何处理的肺癌A549细胞命名为阴性对照组(缩写为Con)。利用RT-PCR法检测CK2α在干扰前后mRNA的变化;Western blot法检测干扰前后CK2α蛋白表达的情况。③MTT和平板克隆形成实验检测CK2α干扰后对肺癌细胞体外增殖能力的影响;④流式细胞仪和TUNEL实验检测CK2α干扰后对肺癌细胞凋亡能力的影响;⑤Transwell及Boyden小室检测CK2α干扰后对肺癌细胞体外迁移运动及侵袭能力的影响;⑥Western blot检测CK2α干扰后细胞凋亡相关蛋白(Caspase-3、Caspase-8、Akt、Bcl-2)的表达。
结果：⑴CK2α在肺癌组织中高表达，在癌旁肺组织中低表达。⑵慢病毒载体pSilencerTM4.1/shCK2α的构建及鉴定，并感染肺癌细胞株A549 PCR和测序证实，成功构建了CK2α shRNA的慢病毒载体pSilencerTM4.1/shCK2α。包装慢病毒，并测得病毒滴度为3.4×108 TU/ml。慢病毒感染A549细胞，然后分选鉴定GFP+细胞，Real time RT-PCR和Western blot鉴定干扰后效率，建立了稳定干扰CK2α的肺癌细胞株A549。Real time RT-PCR结果显示:sh870(0.0007780±0.0005470)、sh1028组(0.0002980±0.0001204) CK2α mRNA的表达水平显著低于Con组(0.007258±0.0002271)、NC组(0.007261±0.0011242)，均P=0.000。Western blot结果显示:sh870(0.703848±0.007816)、sh1028组(0.550648±0.010588)CK2α蛋白的表达水平显著低于Con组(1.313444±0.059472)、NC组(1.084371±0.024494)，均P=0.000。⑶MTT结果显示:随着培养时间的延长，sh870、sh1028组细胞生长速度明显慢于Con和NC组（P＜0.05）。⑷平板克隆形成实验结果显示:sh870(15.67±0.577)、sh1028组(13.33±0.557)克隆形成率明显少于Con(68.33±1.528)和NC组(68.67±3.055)(F=894.009，P＜0.001)。综上所述，干扰CK2α后抑制了肺癌细胞体外增殖能力。⑸流式细胞术结果显示:sh870(27.867±4.818)、sh1028组(29.867±4.588)细胞凋亡数明显高于Con组(3.000±1.058)和NC(2.667±1.320)（F=57.695，P＜0.001）。⑹TUNEL实验结果显示:sh870(7.67±1.155)、sh1028组(7.67±2.082)细胞凋亡数明显高于Con组(1.27±0.462)和NC组(1.67±1.155)(F=21.360，P＜0.001)。⑺Transwell迁移运动实验结果显示:sh870(88.33±6.807)、sh1028组(96.00±10.817)穿过底膜的细胞明显少于Con组(333.67±31.565)和NC组(334.00±31.00)(F=110.215, P＜0.001)。⑻Boyden小室侵袭实验结果显示:sh870(62.00±6.000)、sh1028组(61.33±5.686)穿过基质胶的细胞数明显少于Con组(134.67±10.066)和NC组(134.67±7.638)(F=93.495，P＜0.001)。综上所述，干扰CK2α后显著降低了肺癌细胞的体外迁移和侵袭能力。⑼Western blot结果显示:sh870、sh1028组Caspase-3（F=28.076，P＜0.01）、Caspase-8（F=35.233，P＜0.01）蛋白的表达水平显著高于Con和NC组;而sh870、sh1028组Akt(F=25.866，P＜0.01)、Bcl-2（F=22.103，P＜0.01）蛋白的表达水平明显低于Con和NC组;而sh870和sh1028组，Con和NC组在4种蛋白中的表达无明显差异（P＞0.05）。
结论：①CK2α在肺癌中表达上调。②成功构建了pSilencerTM4.1/CK2α慢病毒干扰载体;转染后，建立了稳定干扰CK2α基因表达的肺癌细胞株A549。③干扰CK2α基因表达后促进了A549细胞的凋亡能力;抑制了A549细胞的增殖、体外迁移运动及侵袭能力;CK2α在肺癌中通过调控Caspase-3、Caspase-8、AKT、Bcl-2等信号蛋白调控肺癌细胞的凋亡。