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目的探究N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(N-acetyl-seryl-aspartyl-lysyl-proline,Ac-SDKP)通过刺猬(Hedgehog,HH)信号通路调控转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)介导的皮肤成纤维细胞活化和迁移的作用及其机制。方法培养新生大鼠的皮肤成纤维细胞,采用第二代成纤维细胞。给予TGF-β1刺激皮肤成纤维细胞,实验分组:(1)对照组、(2)TGF-β1组。采用TGF-β1和SMO受体阻断剂(GDC-0449)作用于皮肤成纤维细胞,实验分组为:(1)对照组、(2)TGF-β1组、(3)GDC-0449组、(4)TGF-β1+GDC-0449组。采用TGF-β1和GLI转录因子阻断剂(GANT61)作用于皮肤成纤维细胞,实验分组:(1)对照组、(2)TGF-β1组、(3)GANT61组、(4)TGF-β1+GANT61组。采用TGF-β1和Ac-SDKP作用于皮肤成纤维细胞,实验分组:(1)对照组、(2)TGF-β1组、(3)Ac-SDKP组、(4)TGF-β1+Ac-SDKP组。免疫组化检测α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscleactin,α-SMA)、Patched(PTC)、Sonic Hedgehog(SHH)、Smoothened(SMO)、GLI1、GLI2、GLI3蛋白的表达;Western blot法检测α-SMA、Ⅰ型胶原(TypeⅠcollagen,ColI)、PTC、SHH、SMO、GLI1、GLI2及GLI3蛋白的表达;采用划痕实验检测皮肤成纤维细胞的迁移能力。结果1给予TGF-β1刺激皮肤成纤维细胞Western Blot结果显示,与对照组相比,TGF-β1组ColI,α-SMA,SHH,SMO,GLI1,GLI2表达分别上调了4.78倍,4.08倍,1.43倍,2.19倍,1.91倍,1.47倍。GLI3,PTC表达分别下调至41.46%,42.23%(P<0.05)。2采用TGF-β1和GDC-0449作用于皮肤成纤维细胞免疫化学法结果显示,(1)在TGF-β1组中细胞胞浆内α-SMA较对照组阳性表达明显增强,给予TGF-β1+GDC-0449干预后α-SMA表达较TGF-β1组减弱。(2)Western Blot结果显示,与对照组相比,TGF-β1组中ColI,α-SMA,SHH,SMO,GLI1,GLI2表达分别上调了1.53倍,1.74倍,1.42倍,2.08倍、1.92倍,1.60倍。PTC及GLI3表达分别下调至67.76%,58.63%。与TGF-β1组相比,在TGF-β1+GDC-0449组中ColI,α-SMA,SHH,SMO,GLI1,GLI2表达分别下调至TGF-β1组的77.68%,73.32%,80.68%,71.93%,67.13%,77.18%。PTC及GLI3表达分别上调了1.45倍,1.33倍(P<0.05)。(3)细胞划痕结果显示,与对照组比较,TGF-β1组细胞迁移至中央划痕区的面积明显增大;给予TGF-β1+GDC-0449干预后细胞迁移至中央划痕区的面积较TGF-β1组减小。3采用TGF-β1和GANT61作用于皮肤成纤维细胞免疫组化结果显示,(1)在TGF-β1组细胞胞浆内α-SMA较对照组阳性表达明显增强,给予TGF-β1+GANT61干预后α-SMA表达较TGF-β1组减弱。(2)与对照组相比,TGF-β1组中ColI,α-SMA,GLI1,GLI2表达分别上调了5.09倍,4.53倍,2.60倍,2.89倍。GLI3表达分别下调至58.63%。与TGF-β1相比,在TGF-β1+GANT61组中ColI,α-SMA,GLI1,GLI2表达分别下降至TGF-β1组的49.81%,37.83%,65.99%,46.763%。GLI3表达上调了1.33倍(P<0.05)。(3)细胞划痕结果显示,与对照组比较,TGF-β1组细胞迁移至中央划痕区的面积明显增大;给予TGF-β1+GANT61刺激后细胞迁移至中央划痕区的面积较TGF-β1组减小。4采用TGF-β1和Ac-SDKP作用于皮肤成纤维细胞免疫组化结果显示,(1)在TGF-β1组α-SMA,SHH,SMO,GLI1,GLI2阳性表达明显增多,PTC,GLI3阳性表达缺失,给予TGF-β1+Ac-SDKP刺激后α-SMA,SHH,SMO,GLI1,GLI2阳性表达较TGF-β1组明显减少,PTC,GLI3阳性表达明显增多。(2)Western Blot结果显示,与对照组相比,TGF-β1组中ColI,α-SMA,SHH,SMO,GLI1,GLI2表达分别上调了8.28倍,4.75倍,3.66倍,3.50倍,2.71倍,2.78倍。PTC及GLI3表达分别下调至14.73%,58.63%。与TGF-β1组相比,在TGF-β1+Ac-SDKP组中ColI,α-SMA,SHH,SMO,GLI1,GLI2表达分别下降至TGF-β1组的79.07%,41.67%,52.25%,68.38%,62.10%,68.44%。PTC及GLI3表达分别上调了2.69倍,1.33倍(P<0.05)。(3)细胞划痕实验显示,TGF-β1组细胞迁移至中央划痕区的面积较对照组明显增大;给予TGF-β1+Ac-SDKP刺激后细胞迁移至中央划痕区的面积较TGF-β1组减小。结论1 TGF-β1诱导皮肤成纤维细胞向肌成纤维细胞转化和HH信号通路激活。2 Ac-SDKP可通过调控HH信号通路,抑制TGF-β1介导的皮肤成纤维细胞向肌成纤维细胞的转化和迁移,进而发挥其抗纤维化的作用。图12幅;表3个;参111篇。