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目的:探讨依普利酮(EPL)对慢性心力衰竭(CHF)患者CD4+T淋巴细胞电压依赖性Kvl.3通道电流变化及Kvl.3等通道mRNA及蛋白质表达的影响,为依普利酮治疗心衰提供免疫学机制。方法:收集临床确诊为慢性心衰(符合纳入标准)Ⅱ、Ⅲ期的患者及正常志愿者外周血样本。用免疫磁珠分选外周血CD4+T淋巴细胞,用流式染色方法检测分离细胞纯度,用CCK-8法检测不同浓度的EPL对CD4+T淋巴细胞活性的影响,用全细胞膜片钳技术记录正常组(Ctrl)、慢性心衰组(CHF)及依普利酮体外干预后(CHF+EPL)的CD4+T淋巴细胞Kvl.3通道电流变化及影响,用RT-PCR方法检测Ctrl组、CHF组及CHF+EPL组培养体系中CD4+T淋巴细胞的Kvl.3、KCa3.1 和 CRAC 通道 mRNA 的表达水平;利用 In-Cell Western Blotting 技术方法检测CD4+T淋巴细胞膜上Kvl.3通道蛋白质的表达水平,用荧光染料Flou-3检测细胞内Ca2+荧光强度,用ELISA方法检测三组培养体系中CD4+T淋巴细胞孵育液中IL-2和TGF-β炎症因子的分泌变化。结果:用免疫磁珠分离所得CD4+T淋巴细胞的纯度为98.7%;EPL最佳抑制浓度为30 μM;慢性心衰患者CD4+T淋巴细胞Kvl.3钾离子通道的峰值电流密度为(217.34±11.74)pA/pF,相比Ctrl组的(44.63±7.43)pA/pF明显增大(P<0.01),依普利酮(EPL)干预后Kvl.3通道峰值电流密度减小为(72.13±10.73)pA/pF,与CHF组相比明显下降,差异具有统计学意义(P<0.01),三组细胞膜电容差异无统计学意义。CHF组Kvl.3通道的mRNA和蛋白质的表达分别是Ctrl组的10.74倍和1.20倍(P<0.01),CHF+EPL组Kvl.3通道的mRNA和蛋白质的表达分别比CHF组降低了 64.80%和39.62%(P<0.01);CHF组KCa3.1和CRAC通道mRNA的表达分别是Ctrl组的4.73倍和3.77倍(P<0.01),CHF+EPL组KCa3.1和CRAC通道mRNA的表达比CHF组分别降低了 19.30%和37.14%(P<0.01)。检测CD4+T胞内钙离子荧光强度值CHF为(140.95±6.56),与Ctrl(14.70±4.94)相比,明显增大(P<0.01),CHF+EPL组为(85.05±2.60),与CHF组相比明显降低。CD4+T淋巴细胞培养基孵育液中IL-2水平分别为,Ctrl:(27.84±0.98)pg/ml,CHF:(153.42±2.02)pg/ml,CHF+EPL:(84.34±2.91)pg/ml,(P<0.01);TGF-β水平分别为,Ctrl:(21.25±0.80)pg/ml,CHF:(37.78±0.84)pg/ml,CHF+EPL:(21.99±1.25)pg/ml。结论:CHF 组 CD4+T淋巴细胞膜上的Kvl.3通道峰值电流密度较Ctrl明显增大,提示在慢性心衰发生发展过程中,免疫系统被激活,CD4+T淋巴细胞向下级细胞分化功能增强,并且相应的细胞炎症因子分泌增多;CD4+T淋巴细胞的三种离子通道的mRNA和蛋白质在慢性心力衰竭情况下均有高表达,依普利酮能够能明显下调Kvl.3、KCa3.1和CRAC离子通道的mRNA的相对表达水平和Kvl.3通道蛋白质的相对表达水平,其中Kvl.3通道的变化尤为突出,依普利酮能够明显降低细胞中Ca2+的含量。推测醛固酮受体拮抗剂可能通过抑制CD4+T淋巴细胞的Kvl.3通道,减少T淋巴细胞的活化/增殖,减少细胞因子释放,从而对心衰有利。