我国是一个养禽大国，家禽的存栏量、禽肉禽蛋的产量均居世界首位，但I群禽腺病毒感染的发生，给我国养禽业造成了严重的经济损失。I群禽腺病毒有5个种(A~E)、12个血清型，其中，血清4型和血清10型病毒可引起心包积水-肝炎综合征，其他血清型的病毒均可引起包涵体肝炎。包涵体肝炎多发生于3~7周龄肉鸡，死亡率达10%~20%，剖检变化表现为肝脏肿大，充血、出血。2015年，我国多省份鸡群爆发了一种以心包积液和大量死亡为特征的急性传染病，该病发病急、传播快，严重危害我国养禽业的健康发展。病毒分离表明，该病为I群禽腺病毒血清4型毒株引起。本研究从临床疑似患病的样品中分离FAdV，对分离株进行鉴定，构建感染模型；选取优势血清型制备三价油乳剂灭活疫苗，旨在为I群禽腺病毒的防控提供技术支撑。　　1、I群禽腺病毒的分离与鉴定　　对本实验室2015～2016年采集的部分疑似感染样品进行了I群禽腺病毒的分离鉴定，对分离毒株进行动物回归试验。结果，共分离得到I群禽腺病毒15株，经鉴定分别为3株血清1型(FAdV-1)、9株血清4型(FAdV-4)、3株血清8a型(FAdV-8a)。将以上分离株静脉接种5日龄SPF雏鸡进行动物回归试验，攻毒组雏鸡均出现精神沉郁，饮食欲减退等明显临床症状，并大量死亡；死亡鸡肝脏出血，表面有白色坏死点或坏死灶，肾脏肿大出血，脾脏肿大；FAdV-4攻毒组死亡雏鸡心包内可见淡黄色清亮液体；病理组织学观察显示，肝细胞核内有明显的嗜碱性包涵体，脾细胞及肝细胞坏死，肝脏出血、炎性细胞浸润，肾脏出血，肾小管上皮细胞崩解坏死。　　2、I群禽腺病毒三价灭活疫苗的制备　　选取优势血清型制备三价油乳剂灭活疫苗，并对其免疫效力进行评估。　　将分离的血清1型、4型、8a型毒株分别接种SPF鸡胚卵黄囊，收取鸡胚尿囊液进行透析浓缩，抗原液(FAdV-1:FAdV-4:FAdV-8a=1:3:1)经甲醛灭活后与吐温-80以96：4的比例混合作为疫苗制备的水相，按照油水比1.6：1进行乳化，制备I群禽腺病毒三价油乳剂灭活疫苗，并对该疫苗的物理性状、最小免疫剂量、疫苗保护效力及免疫后抗体消长规律进行检测。结果表明，制备疫苗的抗原最佳灭活条件为1‰的甲醛37℃处理24h，理化性状及安全性检验结果显示，该疫苗剂型为油包水型，物理性状稳定，未见细菌及支原体等微生物污染。疫苗安全性良好，5日龄肉鸡颈部皮下注射2.0mL，并未出现局部炎性反应及全身性不良反应。疫苗的最小免疫剂量为0.7mL/羽。ELISA结果表明当雏鸡血清中抗体水平达到ELISA OD450 0.7452、0.6215及0.692时，即可有效抵御FAdV-1、FAdV-4及FAdV-8a毒株的攻击，保护力可达80%以上。抗体监测结果显示，血清1型特异性抗体于7dpi开始上升，25dpi达到最高水平，随后逐渐下降；血清4型及血清8a型特异性抗体均于4dpi开始上升，在25dpi达到最高峰，至67dpi，免疫组血清中抗体仍处于较高水平，能为免疫组肉鸡提供良好的保护力。攻毒保护试验中免疫攻毒组90只雏鸡中仅4只(FAdV-1组3只，FAdV-4组1只)出现泄殖腔排毒及明显临床症状，每组保护率均达到90%以上；攻毒对照组雏鸡全部表现出明显临床症状和排毒现象(90/90)。另外，不同血清型FAdV的交叉攻毒试验结果证明，本次制备的疫苗对FAdV-2及FAdV-6具有一定保护力(>70%)。　　综上所述，本研究制备的三价油乳剂灭活疫苗具有良好的免疫效力，能为肉鸡提供较好的保护力，能抵抗相应血清型毒株的攻击。