基于适配体技术的化学发光体系检测谷物中赭曲霉毒素A

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赭曲霉毒素A (OTA)是谷物中常见的污染源,由于产生它的真菌种类比较多从而导致OTA的污染范围相对比较广。目前针对OTA的检测方法存在着检测成本比较高、检测时间相对比较长、需要一些昂贵仪器的支持且操作过程比较复杂等问题,所以建立新型快速高效的检测技术就显得特别的重要。本文以光子晶体微球为载体、以适配体技术为反应基础、以鲁米诺化学发光法为检测手段建立了两种针对谷物中OTA快速高效检测的方法。通过试验室的自制平台,制备出大小均一、结构稳定的二氧化硅光子晶体微球。在其表面进行了四种基团的修饰,分别包括:羧基、环氧基、醛基、异硫氰根基,且以羧基化的微球为例,结合修饰了氨基基团的适配体互补链。并通过红外进行表征,以确证基团和互补链的修饰情况。本文建立了一种适配体竞争化学发光法以检测赭曲霉毒素A,并对其检测过程中的关键因素进行了优化,最终确定了最优试验条件:互补链浓度为4000nmol/L,OTA-aptamer的浓度为4000nmol/L,竞争反应的温度为37℃,竞争反应的时间为1.5h。并根据优化条件建立了最终的标准曲线,其检测范围为0.001 ~1ng/mL,检测限为 0.001ng/mL,标准曲线为:y=-4329.22x+3565.50,其中R2=0.9964。并检测了 OTA-Aptamer的特异性,结果显示OTA-aptamer对OTA具有特异性与其结构类似物OTB之间没有明显的交叉反应。之后与传统的ELISA作了对比分别检测了大米、小麦和玉米这三种谷物中OTA的加标回收率,回收率范围为80.54±1.45~104.55±5.89,两种方法作比较可知本法对于检测谷物中的OTA含量具有可行性。最后通过本法与ELISA法对18组不同谷物中OTA含量的检测分析,比较数据可知,两者数据接近,这就更加确信了本法可以用于实际谷物中OTA的检测。本文又建立了一种DNAzyme-aptamer化学发光法以检测谷物中赭曲霉毒素A,并对其检测过程中的关键因素进行了优化,最终确定了最优试验条件:Mg2+浓度为30mM, k+浓度为9mM, B2链反应时间为30min。并根据优化条件建立了最终的标准曲线,其检测限性范围为0.1~100ng/mL,检测限为0.1ng/mL,标准曲线为:y=8161.35x+24303.63,其中R2=0.9920。并检测了本法的特异性,结果显示本法具有特异性与其他种类的毒素FB1、AFB2没有明显的交叉反应。之后与传统的ELISA作了对比检测了大米、小麦和玉米这三种谷物中OTA的加标回收率,本法回收率范围为72.19±4.20~121.58±9.75。最后也通过与ELISA作对比检测了 18组谷物样品中OTA的真实含量,分析数据可知,两者数据比较接近,这就可以确信本法也可用于实际中OTA的检测。
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