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极低密度脂蛋白受体(very low density lipoprotein receptor,VLDLR)是低密度脂蛋白受体(low density lipoprotein receptor,LDLR)超家族成员之一。由于第16号外显子的选择性剪接，产生两种不同亚型，分别为含O-linked糖链结合域的Ⅰ型VLDLR和不含此结构的Ⅱ型VLDLR。近些年研究发现，VLDLR除了参与脂质代谢外，还可结合多种配体及细胞信号分子，进而影响细胞生物学行为。本室前期对VLDLR的研究过程中发现，胃腺癌细胞SGC7901与影响细胞增殖迁移的配体(uPA-PAI-1、TFPI)结合时，细胞增殖迁移能力改变的同时伴有细胞VLDLR亚型表达量的改变。促进细胞增殖的配体上调了Ⅱ型VLDLR表达，抑制细胞增殖的配体则使Ⅰ型VLDLR表达增加；诱导细胞向不同方向分化时，在无配体存在时，也发现了上述现象，提示VLDLR可能存在非配体依赖作用。为了进一步研究VLDLR影响细胞生物学行为是否存在非配体依赖机制，本实验主要通过构建稳定表达Ⅰ型VLDLR或Ⅱ型VLDLR的ldl-A7细胞株，检测VLDLR亚型对细胞增殖迁移能力的影响，并初步探讨其可能存在的信号途径。
我们利用前期实验已经构建的两种VLDLR真核表达载体pCD-VR1和pCD-VR2,采用Lipofectamine2000介导的方法转染ldl-A7细胞株，通过G418筛选，获得稳定表达Ⅰ型VLDLR或Ⅱ型VLDLR的ldl-A7细胞，并经RT-PCR，Western Blotting 鉴定。细胞模型构建成功后，用MTT法检测细胞增殖能力变化，Transwell小室法检测细胞迁移能力变化。并用Western blotting检测信号分子ERK，p-ERK蛋白水平的表达变化。
稳定表达VLDLR亚型的细胞模型经RT-PCR、Western Blotting 鉴定，ldl-A7-VLDLRⅠ细胞分别于336bp和130KD附近出现条带，而ldl-A7-VLDLRⅡ细胞则于252bp和105KD附近出现条带，与预期结果相符，提示VLDLR亚型细胞模型构建成功。MTT和Transwell小室法实验结果发现稳定表达Ⅱ型VLDLR的细胞株增殖迁移能力较对照组(未转染ldl-A7)明显增强，而稳定表达Ⅰ型VLDLR的ldl-A7细胞增殖迁移能力则较对照组有所降低。实验结果表明两型VLDLR在细胞增殖迁移中发挥非配体依赖作用，Ⅱ型VLDLR促进细胞增殖迁移，而Ⅰ型VLDLR则可能抑制细胞的增殖迁移。对ERK、p-ERK的检测结果发现稳定表达Ⅱ型VLDLR细胞内ERK的磷酸化水平明显高于正常ldl-A7细胞，而ldl-A7-VLDLRⅠ细胞ERK的磷酸化水平较正常组下降。结果提示VLDLR亚型影响细胞学行为的非配体依赖作用可能与胞内信号分子ERK的磷酸化有关。
综上，本实验结果提示VLDLR亚型对细胞学行为的影响存在非配体依赖作用，并可能通过ERK介导细胞信号转导。