沙棘籽粕成分制备及其对Ⅱ型糖尿病的作用机制研究

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中国沙棘,胡颓子科沙棘属沙棘亚种,为落叶灌木或乔木,主要分布在亚洲和欧洲。其果实具有悠久的药用历史,在我国已被广泛应用。  沙棘中具有多种生物活性成分,主要包括维生素、挥发油、黄酮类、萜类、有机酸、甾体、生物碱类、原花青素类等。同时,据沙棘的古籍记载药用和现代药效研究表明,沙棘具有提高免疫力、改善心血管系统、保护消化系统、抗炎修复、抑菌、抗氧化、抗衰老、抗肿瘤等多种药用功效和临床应用价值。  本文以沙棘籽粕为原料,系统地开展沙棘籽粕化学成分的分离、纯化和制备;重点对其中的沙棘总黄酮和原花青素的体外抗氧化活性进行了考察;以小鼠Ⅱ型糖尿病模型,考察沙棘总黄酮和原花青素对氧化应激的干预作用及其降血糖作用;以线粒体为研究靶点,探究沙棘降血糖作用的抗氧化-自由基-线粒体-糖尿病的机制,以期为沙棘的降血糖机制研究提供一个新的思路,同时也为沙棘的深度开发利用提供一定的理论基础。  (1)利用热回流提取法,对沙棘籽粕进行活性部位制备,结合大孔树脂富集技术,得到了水部位、正丁醇部位(N,N1,N2,N3,N4,N5)、乙酸乙酯部位(E1,E2,E3,E4),并测定各活性部位中总黄酮、原花青素和多糖的含量,正丁醇N4部位定为原花青素部位。  (2)采用传统柱色谱(Sephadex LH-20、MCI Gel和硅胶)制备色谱和高速逆流色谱法,对沙棘籽粕各活性部位进行分离、纯化和制备,得到了12个单体化合物,生物碱类化合物5个、黄酮类化合物5个和原花青素类化合物2个,其中,4个化合物为新化合物,分别为hippophanone、hippophamide、N-cis-p-Coumaroyl-4-aminobutan-1-ol和N-p-Coumaroyl-4-aminobutan-1-ol。  (3)通过DPPH自由基法和线粒体活性氧法对沙棘籽粕活性部位和单体化合物抗氧化能力进行综合评价。结果显示,沙棘籽粕活性部位抗氧化能力强弱依次为乙酸乙酯E2部位>原花青素部位>正丁醇部位>水部位;沙棘籽粕单体化合物抗氧化能力强弱依次为化合物2>化合物3>化合物8>化合物10>化合物9>化合物1。  (4)通过高脂饲料和链脲佐菌素联合诱导建立了Ⅱ型糖尿病模型,研究结果表明,沙棘籽粕活性部位可能通过调节和改善机体氧化还原酶系,使机体氧化还原酶系重新达到平衡,进而促使血糖、甘油三酯等血脂水平趋于正常,最终达到降血糖作用。  (5)通过线粒体呼吸功能、活性氧水平和膜电势对线粒体功能进行综合评价。结果表明,沙棘籽粕活性部位对Ⅱ糖尿病的治疗和改善作用,与对线粒体功能的影响有着密切的联系,表现在对线粒体呼吸功能、活性氧水平和膜电势水平的影响。
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