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第一部分KM-5000DE自动旋转型微型角膜上皮刀法与乙醇法制作的兔角膜上皮瓣的组织病理学比较目的探讨KM-5000DE自动旋转型微型角膜上皮刀法制作兔角膜上皮瓣的安全性与稳定性，并与乙醇法制作的角膜上皮瓣作组织病理学上的比较，为进一步实验打下基础。方法11只(22眼)新西兰大白兔，随机编号。其中10只(20眼)随机一眼用KM-5000DE自动旋转型角膜上皮刀作角膜上皮瓣，另一眼行乙醇法(20％乙醇35秒)作角膜上皮瓣，观察运刀情况及制瓣情况，并作光镜(PAS染色)和透射电镜观察。结果KM-5000DE自动旋转型微型角膜上皮刀运刀均流畅，上皮瓣均贴附良好，瓣缘光滑，其中1眼为游离瓣，无破碎瓣，PAS染色法示上皮瓣不包含任何基质组织，基底膜完整连续，基底细胞连接紧密，电镜观察示基底膜包括完整的致密层，透明层与半桥粒结构，基底细胞微超结构正常。乙醇法制作的角膜上皮瓣瓣缘不整齐，有2眼瓣破损，PAS染色法示上皮瓣基底膜不连续、断裂与缺乏，基底细胞间隙增大，甚至离断，电镜示基底细胞内空泡增多，细胞间间隙增大，基底膜不完整，无透明层与致密层。结论KM-5000DE自动旋转型微型角膜上皮刀制作兔角膜上皮瓣安全、有效和简易。该型角膜上皮刀制作的角膜上皮瓣包括完整基底膜，基底细胞形态连接正常，而乙醇法制作的角膜上皮瓣基底膜不完整，分离平面位于基底膜和基底细胞之间，基底细胞间连接松散。KM-5000DE自动旋转型微型角膜上皮刀适合用来作微型角膜刀法上皮瓣下准分子激光磨镶术(Epi-LASIK)的动物实验。第二部分Epi-LASIK与LASEK术后角膜创伤愈合对比的实验研究目的比较Epi-LASIK与LASEK术后角膜创伤愈合情况，在组织与分子病理学上探讨角膜上皮下雾状混浊(haze)的差别与成因。方法50只新西兰大白兔随机编号，其中48只(96眼)随机一眼行Epi-LASIK，另眼行LASEK，余2只(4眼)未手术眼作为对照组。采用裂隙灯显微镜下观察haze情况；透射电镜观察角膜基质细胞形态的改变；TdT介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)观察角膜基质细胞的凋亡情况；Ki-67、α-SMA、Ⅲ型胶原和TGF-β1的免疫组化，免疫印迹法测定角膜组织α-SMA和Ⅲ型胶原蛋白和实时荧光定量PCR测定TGF-β1mRNA的表达，来观察角膜基质细胞的增殖与向肌成纤维母细胞转化、细胞外基质(Ⅲ型胶原)和TGF-β1的表达情况，作计数与半定量分析，进行对haze形成影响的分析。结果裂隙灯显微镜下示LASEK术后1月与3月haze均较同期Epi-LASIK术后明显。透射电镜检查示LASEK术后早期更易发现凋亡细胞，与同期Epi-LASIK相比，细胞器代谢更活跃及胶原排列更紊乱。Epi-LASIK与LASEK术后早期角膜基质中均有较多的TUNEL阳性细胞出现，在术后24小时达到最高峰，LASEK术后1周内较Epi-LASIK有明显的细胞凋亡情况(P＜0.01)。基质Ki-67阳性细胞术后1周内均有增高的表达，72小时时表达最高，两组在1周内差异有显著性(P＜0.01)。α-SMA阳性细胞在术后1周开始明显出现，3月时仍有较高表达，在术后1月时阳性细胞数达到最高，α-SMA蛋白表达量的情况与α-SMA阳性细胞数变化一致，LASEK术后增高的情况较同期Epi—LASIK差异有统计学意义(P＜0.01)。Ⅲ型胶原免疫组化及免疫印迹法示LASEK术后1周、1月和3月的表达均较同期Epi-LASIK术后为高(P＜0.01)，最高峰均在术后1月；TGF-β1免疫组化及mRNA实时荧光定量PCR测定有类似变化，TGF-β1mRNA二种术式同期间差异明显(P＜0.01)。结论Epi-LASIK较LASEK有着更轻的角膜基质细胞凋亡、更弱的增殖以及向肌成纤维母细胞的转化，并有着更少的细胞外基质(Ⅲ型胶原)和TGF-β1的生成，提示着Epi-LASIK较LASEK有着更轻haze反应几率。完整角膜上皮层的维持有利于减少术后haze的形成。第三部分微型角膜刀法与乙醇法制作的离体兔角膜上皮瓣对培养角膜基质细胞影响的实验研究目的通过比较微型角膜刀法与乙醇法制作的离体兔角膜上皮瓣对培养角膜基质细胞增殖与转化的影响，探讨角膜上皮的完整性在减轻haze形成中的作用。方法酶消化法分离培养兔角膜基质细胞，分为空白对照(1％serum DMEM)、阳性对照(1ng／ml TGF-β1)、微型角膜刀法角膜上皮瓣共培养(Epi-LASIK法)、乙醇法角膜上皮瓣共培养(LASEK法)及该二组共培养分别加TGF-β1抗体6组。相差显微镜下观察角膜基质细胞形态的改变，Ki-67免疫组化观察角膜基质细胞增殖、和α-SMA免疫组化及免疫印迹法观察向肌成纤维母细胞转化情况。结果培养的角膜基质细胞早期表现为胞体与突起细长，随着时间延长，胞体与突起增大，胞浆丰富，这在LASEK法与Epi-LASIK法共培养组更为明显。共培养3天后Ki-67免疫组化阳性细胞计数示Epi-LASIK和LASEK法共培养组较空白对照组高，有统计学上差异(P＜0.01)，但二者间无统计学差异(P＞0.05)，Epi-LASIK和LASEK法共培养组与相应的加TGF-β1抗体组均有统计学上差异(P＜0.05)，但加TGF-β1抗体组均与空白对照组均无统计学差异(P＞0.05)。共培养5天后α-SMA免疫组化示Epi-LASIK法和LASEK法组均较相应加TGF-β1抗体组和空白对照组的细胞更为粗大，荧光强度高，进一步的免疫印迹法示α-SMA蛋白表达在Epi-LASIK法和LASEK法组共培养组间无统计学差异(P＞0.05)，该二组与相应加TGF-β1抗体组、空白对照均有统计学上差异(P＜0.01)，但加TGF-β1抗体组均与空白对照组无统计学差异(P＞0.05)。结论完整角膜上皮层的良好屏障作用减弱了泪液等对角膜基质的作用可能是造成Epi-LASIK与LASEK术后haze的差异主要原因。TGF-β1可能在角膜上皮促进haze形成中有重要作用。确切的机制尚需进一步深入。