耐盐碱产纤维素酶芽孢杆菌的选育及酶学特性的研究

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纤维素作为一种数量极其庞大的可再生资源将会成为食品、能源等领域的重要原料,适应性强、酶活高、稳定性强的高效纤维素酶是其有效降解和充分应用的关键,高产纤维素酶菌种选育是获得高效纤维素酶的重要途径。细菌分泌的纤维素酶大部分都适合中性和偏碱性的环境,对天然纤维素具有很强的分解能力,能够节省资金还能够缩短生产时间,对于适合碱性生产环境的行业来说具有广阔的应用前景。本文以山东省东营市黄河三角洲地区盐碱地土样为菌源,采用先进的微生物学技术方法,筛选、诱变、鉴定得到了耐盐碱纤维素酶高产菌株,研究了其培养条件和酶学特性,主要结果、结论如下:1、以山东省东营市黄河三角洲地区盐碱地土样为菌源,筛选得到23株耐高盐高碱的产纤维素酶细菌,经形态鉴定、理化鉴定和分子鉴定为枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、摩加夫芽孢杆菌和绿脓杆菌四类;高产菌株YRD-19经鉴定为枯草芽孢杆菌。2、对YRD-19菌体进行紫外诱变,得到酶活稳定性好的目的菌株YRD-19-35,其纤维素酶活性是诱变之前的5.97倍。3、优化得到适于YRD-19-35产酶的培养基为:1.5%乳糖,1.5%蛋白胨,NaCl:KH2PO4=5:1,添加量为0.55%;采用接种量为2%,发酵温度为37℃,培养基初始pH值为8.0,种子活化时间为24 h,发酵时间为48 h,装液量为50 mL,摇床转速为200 r/min的培养条件,YRD-19-35所产的纤维素酶酶活为229.6 U/g,比优化前提高了1.5倍。4、对高产菌株YRD-19-35所分泌的纤维素酶酶学特性研究表明,该菌株分泌的纤维素酶耐高温60℃,耐盐碱pH值8.0,当盐度达到饱和状态时,该纤维素酶仍能保持70%以上的酶活性。
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