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目的:明确MIRI中mi RNA调控心肌细胞自噬的分子机制;在此基础上,通过体外细胞实验明确壮药三藤养心通脉方通过mi RNA调控心肌细胞自噬防治MIRI的分子机制,为壮药三藤养心通脉方防治MIRI提供实验依据。方法:第一部分生物信息学分析:通过NCBI中GEO Data Sets数据库,分析筛选在缺血再灌注损伤中差异表达较明显并下调的mi RNA,并通过Pubmed、中国知网等数据库的检索分析,确定目的mi RNA。再通过Targetscan、David等数据库检索预测目的mi RNA可能的靶基因和调控的信号通路。第二部分实验研究:一、mi R-224-5p靶向调控PTEN/PI3K/AKT通路介导H/R心肌细胞自噬的研究。在体外构建H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,模拟体内心肌缺血再灌注损伤。心肌细胞分组:（1）正常对照组（control）;（2）缺氧/复氧损伤模型组（H/R）;（3）mi R-224-5p过表达组（mi R-224-5p mimics）;（4）mi R-224-5p抑制组（mi R-224-5p inhibitor）;（5）mi R-224-5p过表达+PI3K抑制组（mi R-224-5p mimics+PI-103）。二、壮药三藤养心通脉方调控H/R心肌细胞自噬的机制研究。大鼠中药灌胃,制备壮药三藤养心通脉方含药血清,并通过CCK8检测细胞活力,确定含药血清最佳干预浓度和时间。心肌细胞分组:（1）正常对照组;（2）缺氧/复氧损伤模型组;（3）壮药三藤养心通脉方组。实验研究中通过CCK8试剂盒检测细胞活力,乳酸脱氢酶细胞毒性试剂盒检测LDH漏出率;通过q RT-PCR检测细胞mi R-224-5p的相对表达量;通过Western blot检测各组细胞自噬相关蛋白（Beclin1、LC3I、LC3II）以及信号通路蛋白（PTEN、AKT、p-AKT）的表达水平。以上实验数据均至少重复3次,应用统计软件和绘图软件Graphpad prism6.0对实验结果进行统计学分析以及绘制图表,两组间的差异比较选择两个独立样本的t检验,多组比较选择单因素方差分析,P<0.05时则视为差异有统计学意义。结果:第一部分:选取在缺血再灌注损伤中表达下调的mi R-224-5p做为本课题的研究对象,PTEN为其预测的靶基因,PI3K/AKT为其调控的信号通路。第二部分:一、mi R-224-5p靶向调控PTEN/PI3K/AKT通路介导H/R心肌细胞自噬的研究。1、与正常组相比,H/R模型组LDH漏出率升高,细胞活力下降,差异有统计学意义（P<0.05）;mi R-224-5p在H9c2心肌细胞H/R损伤模型中表达明显下调（P<0.01）。Western blot结果显示,自噬相关蛋白Beclin1、LC3I、LC3II在模型中的相对表达量较正常组高,靶基因PTEN在模型组中表达升高,通路蛋白AKT的磷酸化水平（以p-AKT/AKT比值表示）下降,差异均有统计学意义（P<0.05）。2、与H/R组和mi R-224-5p抑制组相比,mi R-224-5p过表达组中PTEN蛋白表达水平下调,p-AKT/AKT比值升高,LC3II/LC3I比值及Beclin1表达均下调,且细胞培养基中LDH漏出率减少,细胞活性增加,差异有统计学意义（P<0.05）;与mi R-224-5p过表达组相比,mi R-224-5p过表达+PI3K抑制剂组中LC3II/LC3I比值及Beclin1表达明显升高,细胞培养基中LDH漏出率升高,细胞活性下降,差异有统计学意义（P<0.05）。二、壮药三藤养心通脉方调控H/R心肌细胞自噬的机制研究:与H/R组相比,壮药三藤养心通脉方组的LDH漏出率减少,细胞活力升高,差异有统计学意义（P<0.05）。Western blot结果显示,与H/R组相比,壮药三藤养心通脉方组LC3II/LC3I比值及Beclin1表达下调,差异有统计学意义（P<0.05）。q RT-PCR结果显示,与H/R组相比,壮药三藤养心通脉方组的mi R-224-5p表达上调,差异有统计学意义（P<0.05）。结论:1、mi R-224-5p在心肌细胞缺氧/复氧中表达下调。2、过表达mi R-224-5p能抑制缺氧/复氧诱导的心肌细胞自噬,而抑制mi R-224-5p表达则能促进自噬的激活;mi R-224-5p通过抑制其靶基因PTEN的表达,使PI3K/AKT信号通路活性增加,抑制心肌细胞过度自噬,减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤。3、壮药三藤养心通脉方可通过上调mi R-224-5p表达,参与自噬的调节,减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤。