背景：系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)是典型的非器官特异性自身免疫病，其自身免疫异常表型特别丰富，几乎覆盖整个免疫系统，被公认为是自身免疫病的原型。患者突出表现为血清中出现多种自身抗体，通过免疫复合物等途径造成多个系统和器官的损害。SLE多见于育龄妇女，与同龄男性之比为9：1。世界各地报告SLE的发病率约在10-100／10万之间，我国SLE的发病率为70／10万，而妇女的发病率约为1／1000。SLE的病因和发病机制尚不甚清楚。研究表明，SLE的发病存在遗传异质性，主要表现为受遗传背景、环境和(或)性激素等因素共同影响。这些因素一方面通过改变DNA的结构，另一方面激活免疫系统，造成严重的免疫功能异常。SLE的免疫学特征是存在T细胞和NK细胞的功能异常，引起多克隆B淋巴细胞激活，产生多种自身抗体，形成免疫复合物，导致全身多系统、多器官的慢性炎症损害。机体免疫功能紊乱在SLE的发生发展过程中起着至关重要的作用。很多研究已证实，淋巴细胞亚群失衡与SLE的发生发展密切相关。SLE中B细胞产生自身抗体呈T细胞依赖性，T细胞在SLE的发生发展中发挥重要作用。T细胞对自身抗原的识别与反应受MHC的Ⅰ类和Ⅱ类分子决定。SLE患者T细胞异常活化，易于产生免疫应答。狼疮鼠T细胞在低剂量抗原刺激下，即可明显增殖，IL-2产生大大增高。研究提示，狼疮相关的T细胞生物学特点发生了改变，刺激阈值降低，在遭遇自身抗原刺激时易被激活而不表现“无能”状态。杀伤细胞免疫球蛋白样受体(Killer cell immunoglobulin-like receptors，KIR)是NK细胞和某些T细胞表面表达的一组特异性识别人类主要组织相容性抗原MHC-Ⅰ类分子的受体，是继HLA后发现的具有高度多样性的免疫调节基因家族，对NK细胞和T细胞具有重要免疫调节作用。KIR根据功能分为抑制性和活化性两类受体。它们的膜外区有Ig样结构域，属于免疫球蛋白超家族。编码KIR的基因位于染色体19q13.42，是具有高度多样性的多基因家族。到目前为止，KIR基因家族已发现14个编码基因和2个假基因，KIR基因的多样性除等位基因多态性外，还包括单倍型(haplotype)组成基因的多样性，不同的个体具有不同的KIR基因数目及种类，这类似于HLA-DR的基因多态性，是KIR基因多样性的特征。单倍型根据基因成分的不同分为A和B两类。因而KIR基因家族具有更丰富的多样性。KIR根据胞浆区长短和免疫受体酪氨酸抑制性基序ITIM(immunoreceptor tyrosine-based inlibitory motify)的有无，功能上分为抑制性(KIR-L)和活化性(KIR-S)两种。长的胞内段存在着免疫受体酪氨酸抑制性基序(immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motif，ITIM)，介导免疫细胞的抑制性信号。短的胞内段缺乏ITIM结构，但其跨膜区有带正电的赖氨酸，与其他免疫酪氨酸激活基序(ITAM)的分子偶联传导激活性信号。人KIR识别经典的HLA-I类分子，有一定的重链α1多态性的特异性。KIR2D与HLA-Cw分子结合，KIR2D分子胞外的第一及第二Ⅱg样结构域分别识别HLA-Cw配体分子的α1和α2结构域。根据HLA-Cw分子α1螺旋的第77和80位氨基酸的不同，将HLA-Cw多态性分子分为两类：一类为第77位和80位氨基酸分别为天冬酰胺和赖氨酸的HLA-Cw同种异型分子，有CW2、CW4、CW5、CW6，可被KIR2DL1识别；另一类为第77位和80位分别为丝氨酸和天冬酰胺的HLA-Cw同种异型分子，包括CW1、CW3、CW7、CW8，被KIR2DL2及KIR2DL3识别。这两处氨基酸残基尤以第80位重要，它区分出不同的HLA-Cw分子，而第77位氨基酸残基则决定其对KIR的结合。KIR特异性识别靶细胞表面的MHC-I类分子，传导激活或抑制信号，在机体先天性和获得性抗肿瘤免疫、抗病毒免疫应答、免疫自稳和耐受等领域发挥调节作用。近年来，KIR在自身免疫病中的作用越来越受到重视，在合并血管炎的类风湿关节炎、血清阴性脊柱关节病、硬皮病、银屑病、Ⅰ型糖尿病等均发现与活性KIR基因异常有关。目的：分析SLE患者杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因多样性，探讨KIR2D-HLA-Cw受体配体对与系统性红斑狼疮易感性的关系，并分析了KIR基因与SLE临床表型的关联性。方法：1、选取93名系统性红斑狼疮患者和123名年龄、性别相配比的健康对照，应用PCR／SSP的方法，对KIR基因家族的15个KIR基因(包括KIR2DL1-5，2DS1-5，3DL1-3、3DS1以及2DP1)进行扩增(除KIR2DS5基因外，每个基因均应用2对不同的序列特异性引物)，根据凝胶电泳的结果，对患者和对照组人群15个KIR基因的基因频率、基因型频率进行分析比较。2、用PCR-SSP法测定方法1中88例SLE患者和86例对照HLA-Cw01-08基因表型频率，并分析KIR-HLA-Cw受体配体对与SLE的相关性。3、记录SLE患者的临床表现及实验室检查，分析KIR基因及KIR2DS1(+)2DL1-HLA-Cw(—)与临床特征的关系。结果：1、SLE病例组与对照组基因频率分布的比较：与对照组相比，SLE病例组中KIR2DS1(p＜0.001)、KIR2DL2(p＜0.001)基因的阳性率较对照组显著性升高，其余基因未发现差异有统计学意义。2、SLE病例组中不同发病年龄组间KIR基因分布频率的比较：将发病年龄分为≤20岁组、20-40岁组和≥40岁三组，比较KIR基因频率的分布，差异无统计学意义。3、SLE病例组与对照组活化型KIR基因个数的分布：SLE组中携带2个或2个以上活化型KIR基因个数的个体较对照组明显增多，差异具有统计学意义(P=0.025)4、SLE病例组和对照组基因型的分布：病例组和对照组共检出57种基因型，病例组中检出30个基因型，对照组检出40个基因型。57种基因型中30个已被报道过，27个未见报道。5、SLE病例组和对照组基因型的比较：病例组3DL3~+，2DS2~-，2DL2~+，2DL3~+，KIRZ~+，2DL1~+，2DL4~+，3DL1~+，3DS1~-，2DL5~-，2DS3~-，2DS5~-，2DS1~+，2DS4~+，3DL2~+基因型阳性率最高，占16.13％，与对照组占0.81％比较，P＜0.001；对照组中3DL3~+，2DS2~-，2DL2~-，2DL3~+，KIRZ~+，2DL1~+，2DL4~+，3DL1~+，3DS1~-，2DL5~-，2DS3~-，2DS5~-，2DS1~-，2DS4~+，3DL2~+基因型阳性率最高，占19.51％，该基因型在SLE组中占5.38％，两组比较P=0.004。差异均有显著性差别。两种基因型比较主要是病例组比对照组中多了2DL2和2DS1。6、KIR2D-HLA-Cw受体配体对在SLE和正常对照组的比较：我们分析了KIR2D-HLA-Cw的受体配体与SLE的关系。结果表明抑制性KIR2D-HLA-Cw受体配对在SLE组和正常对照组的分布频率，无显著性差异。分析活化性KIR2D-HLA-Cw在SLE和对照组中的分布频率，无显著性差异。7、活性KIR而相应的抑制性受体配体对缺乏的基因在SLE和正常对照组的比较：我们分析了单独表现活性KIR而相应的抑制性受体配体对缺乏的基因频率。发现SLE组KIR2DS1在其抑制性受体配体对缺失时频率升高，差异有显著性。8、KIR基因与SLE患者临床表现及实验室检查的关系：结果表明：KIR2DS5阳性个体中，脱发患者数明显多于无脱发患者数，两者差异有统计学意义(p=0.005)；中枢神经系统异常患者中KIR3DS1阳性个体明显多于阴性个体，两者差异有显著性(P=0.013)。KIR基因与系统性红斑狼疮自身抗体及免疫球蛋白、补体的无相关性。9、KIR2DS1(+)2DL1-HLA-Cw(-)与SLE临床表现及实验室检查未见相关性。结论：1、活化性KIR基因KIR2DS1在其抑制性配体对KIR2DL1／HLA-Cw缺失时，SLE组的基因频率高于正常人群，可能与SLE发病相关。当个体单独表达KIR2DS1，而不表达抑制性KIR-HLA-Cw配对时活化性KIR可以通过HLA-Cw以外的配体活化，NK细胞或T细胞的激活阈值下降，容易产生对自身细胞的免疫攻击，成为自身免疫性疾病发生的基础。2、SLE患者KIR2DS5可能是出现脱发的影响因素(P=0.005)，而KIR3DS1患者则可能是发生神经精神性狼疮的原因之一。不同的KIR基因可能介导不同的临床特征。3、KIR基因平衡紊乱有可能打破NK细胞和T细胞受体平衡，使免疫细胞功能异常，这可能是SLE发病及多种临床表现的免疫遗传因素之一。