1.蒜头果蛋白质的结晶研究;2.蒜头果果仁中化学成分的研究

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本研究论文分两部分:蒜头果蛋白质的结晶研究和蒜头果果仁化学成分的研究。 蒜头果(MalaniaoleiferaChunetLee)属于铁青树科(Olacaceae)蒜头果属,取其种仁经分离、纯化得到一种全新的蒜头果毒蛋白质,其分子量为55kD左右;加2-巯基乙醇还原后,显示两条带,A链的分子量为30kD左右;B链的分子量为23kD左右。通过氨基酸测序知A链的N-末端序列为NH2-D-E-T-X-T-D-E-E-F-N(X一般情况下为C),B链为NH2-D-Y-P-K-L-T-F-T-T-S。该蛋白质有强烈的非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)毒性和人宫颈癌细胞(Hela细胞),其对Hela细胞的IC50=1.26×10-9mol/L,具有用于免疫毒素治疗癌症的应用前景。 对该蒜头果蛋白质分子的结构全面解析是下一步工作的研究重点,只有进行结构解析才能揭示其如此强生物活性以及细胞毒性与该蛋白质结构的关系,从而可以针对其活性位点进行化学修饰,应用到临床。培养蛋白质单晶进行X射线衍射是最可靠的获取三维结构的方法。其前提条件是要得到合适的蛋白质晶体,如何获得蛋白质晶体一直是对蛋白质结构分析的瓶颈.本文运用Jancarik和Kim提出的46种稀疏矩阵用悬滴结晶法进行蒜头果蛋白质结晶条件的筛选,并对有现象的条件进行优化,观察到有单晶生成,通过改变结晶方法,加大溶液的量来培养高质量的晶体来进行X射线衍射。 由于对蒜头果除油脂外的化学成分研究未见报道,本文对蒜头果果仁进行化学成分研究,期待从果仁中分离出新的活性物质。从其80%工业乙醇的浸膏中分离出了10个化合物,他们主要以糖苷与脂肪酸为主,并对其总浸膏做了对Hela细胞的活性测定,结果发现蒜头果果仁的浸膏活性很低对Hela细胞的IC50仅为0.1364g/mL,远远低于蒜头果粗蛋白质(IC50=2.51×10-5g/mL)和蒜头果蛋白(IC50=6.93×10-8g/mL)对Hela细胞的活性,因此可以得出蒜头果中的活性成分主要集中在蛋白质部分。
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