组织蛋白酶D (CTSD)是影响肌肉嫩化的重要物质之一,胱氨酸蛋白酶抑制剂B (CSTB)是半胱氨酸蛋白酶抑制基因家族的代表性基因,主要通过抑制蛋白酶活性从而影响到肉的品质嫩度。本试验在天府肉羊中首次选择CTSD和CSTB基因运用分子克隆技术进行CDS区的克隆,并提交至NCBI获得登录号为：KJ004415和KF991243,随后采用实时荧光定量RT-PCR技术检测这两个基因的mRNA在天府肉羊的心脏、肝脏、脾脏、肺、肾脏、股二头肌、腹直肌和背最长肌八个组织中的表达,继而检测了这两个基因在天府肉羊不同时间段的表达,并用蛋白印迹杂交技术在蛋白水平检测了它们在天府肉羊各个组织中的表达情况。结果显示CTSD基因完整的开放阅读框为1239bp,共编码412个氨基酸,该氨基酸拥有20个磷酸化位点,预测的蛋白二级结构主要无规卷曲和延伸链,CTSD蛋白存在信号肽、A1_Propeptide前体结构域和Asp结构域,这个结构与CTSD蛋白在其他物种上研究相符合,系统进化树分析显示其与牛的基因同源性最高,与物种间的同源性和生物进化关系亲源性的远近也相符合,实时荧光定量RT-PCR结果显示在8个试验组织中,CTSD基因在肺中的表达量最高,其次是肝脏和肾脏,在股二头肌、腹直肌和背最长肌三种骨骼肌中的表达量最低,而且在背最长肌中,CTSD基因随着时间的增长其表达量呈现出先上升后下降的趋势,在12月龄达到最高点,后经蛋白印记杂交分析后也仅在股二头肌、腹直肌和背最长肌中检测到目的条带。CSTB基因的完整开放阅读框为306bp,共编码101个氨基酸,CSTB蛋白拥有3个磷酸化位点,预测的蛋白二级结构也是以无规卷曲和α-螺旋为主,并且不存在信号肽,预测到存在Cystatin-like结构域,在系统进化树分析显示天府肉羊CSTB蛋白与牛的CSTB蛋白有很近的进化关系和遗传关系,并与其他物种间的同源性、生物进化关系亲源性的远近也相符合,实时荧光定量RT-PCR结果显示在天府肉羊8个试验组织中,CSTB基因在肺的表达量最高,其次是脾脏,同样在股二头肌、腹直肌和背最长肌三种骨骼肌中的表达量最低,在背最长肌中CSTB基因随着天府肉羊年龄的增长其表达量出现先上升后下降的趋势,同样是在12月龄达到最高点,之后开始下降,而蛋白印迹杂交结果显示仅在心、肝、脾、肺和肾中检测到CSTB蛋白条带。