病毒介导RNAi抑制害虫P450基因的表达

来源 :中国科学院武汉病毒研究所 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zjzhanjx
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由于化学农药的大量使用,一些主要农业害虫对化学农药的抗性问题越来越严重。细胞色素P450酶系是昆虫对杀虫剂解毒的重要酶系,该酶活性的增强与害虫抗药性的产生有关。RNAi是近年来产生的一项新兴生物技术,能够对多种生物中的基因进行沉默。本论文以棉铃虫核多角体病毒为载体,构建了含有棉铃虫中肠P450基因CYP8的一个490bp的正向和反向片段的重组棉铃虫核多角体病毒,用RNAi技术对棉铃虫CYP8基因进行了沉默,以期抑制棉铃虫对农药的抗性,为治理害虫的抗药性提供新的途径。本论文分两章。   第一章:由三个部分组成。第一部分概括介绍了杆状病毒生物学、分子生物学研究进展和应用研究情况;第二部分主要综述了棉铃虫对菊酯类杀虫剂的抗性情况及昆虫P450基因的研究进展;第三部分概述了RNAi的发展简史、分子机制和其生物学功能。   第二章:将棉铃虫中肠P450基因CYP8一个490bp片段的正向和反向克隆进入pFastBacDual中,同时将绿色荧光蛋白酶基因(egfp)和多角体蛋白基因(polh)引入该质粒,获得重组质粒pFastBacCYP-EGFP-Polh,经转座含HearNPV Bacmid的大肠杆菌和转染昆虫细胞系后,获得重组棉铃虫病毒HaBacCYP。该病毒在感染棉铃虫后,能明显抑制宿主体内P450基因的表达。当用对溴氰菊酯敏感的棉铃虫幼虫进行生测实验时,该重组病毒与溴氰菊酯的联合应用并没有表现出增效作用。文章对出现这种结果的原因进行了初步讨论。
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