肿瘤微环境是肿瘤发生发展过程中所处的内环境，肿瘤微环境中各种成分之间的相互作用是肿瘤发生发展的决定因素。因此在进行肿瘤研究时，对于肿瘤微环境的探讨尤为重要。越来越多的证据表明，浸润到肿瘤微环境中的髓源细胞对肿瘤的生长和转移起到重要作用，其中包括巨噬细胞和肥大细胞。但其在肿瘤微环境中功能变化的机制尚不清楚。本研究旨在探讨巨噬细胞、肥大细胞在肿瘤发生发展中的作用，并初步探讨其机制。本研究分四部分，分别研究巨噬细胞和肥大细胞在肿瘤微环境中的功能变化：　　 第一、二部分：肿瘤微环境对巨噬细胞的影响。我们采用H22细胞和骨髓F4/80+细胞，即Gr-1+CD11b+F4/80+骨髓来源单核细胞（Bone marrow-derived monocytes，BMDMs）混合接种小鼠，或瘤内注射骨髓F4/80+细胞的方法，发现骨髓F4/80+细胞在肿瘤微环境中产生促瘤生长功能。因此我们采用了反复冻融法制备坏死肿瘤细胞释放物（molecules from necrotic tumor cells，NTC-Ms）模拟肿瘤微环境，发现NTC-Ms能促进肿瘤生长；且NTC-Ms诱导骨髓F4/80+细胞具有了MDSC表型，能抑制T细胞增殖。由于NTC-Ms中含有大量的内源性Toll样受体配体，我们采用肌肉内转染sTLR4表达载体的方法，观察是否TLR4参与了NTC-Ms对骨髓F4/80+细胞的诱导作用。结果显示：sTLR4能显著抑制肿瘤生长；当刚出现可触及肿瘤时（7d），sTLR4能使肿瘤组织内F4/80+细胞Arg1基因转录水平下降，而Nos2和IL-12基因转录水平升高。我们进一步观察了肿瘤组织和肿瘤免疫治疗组织中F4/80+细胞的表型，发现均为Gr-1+CD11b+F4/80+，而sTLR4同样也能增加肿瘤免疫治疗组织中F4/80+细胞Nos2和IL-12转录水平，增强4-1BBL/sPD-1肿瘤抑制作用；且更进一步降低了肿瘤免疫治疗组织中F4/80+细胞诱导T细胞凋亡的能力。以上结果表明；在肿瘤微环境中，NTC-Ms通过TLR4途径诱导巨噬细胞产生促瘤生长功能；肿瘤免疫治疗过程中，肿瘤细胞的破坏也可通过TLR4影响巨噬细胞。　　 第三、四部分：肿瘤微环境对肥大细胞的影响。我们采用骨髓来源肥大细胞（bone marrow-derived mast cells，BMMCs）和H22细胞混合接种或瘤内注射BMMCs的方法，发现BMMCs在肿瘤微环境中产生促瘤生长功能。由于SCF是肥大细胞分化成熟的重要因子，因此我们观察了SCF对BMMCs的作用，结果发现SCF预处理的BMMCs抑瘤作用减弱。接下来我们用NTC-Ms、TI-Ms模拟肿瘤微环境，发现NTC-Ms、TI-Ms预处理的BMMCs能促进肿瘤生长，而resveratrol、QNZ减弱了NTC-Ms的作用，提示TLR4和SCF可能参与了NTC-Ms对BMMCs的诱导作用。因此，我们首先证明了NTC-Ms和TI-Ms中含有功能性SCF，然后用SCF和TLR4的特异性配体LPS协同刺激BMMCs，发现BMMCs产生了促瘤生长功能；而在瘤内注射BMMCs的模型中，肌肉内转染sTLR4表达载体，则减弱了肥大细胞的促瘤功能，进一步说明SCF和TLR4配体增强了肥大细胞促瘤生长潜能。为了明确SCF和TLR4配体发挥作用的机制，我们观察了不同处理条件下，BMMCs脱颗粒、IL-10表达和对肿瘤生长的影响。结果显示，SCF/LPS、NTC-Ms和TI-Ms均能抑制肥大细胞自发脱颗粒，但不影响VEGF和PDGF的表达；且SCF/LPS、NTC-Ms和TI-Ms均能刺激BMMCs表达IL-10；resveratrol、wortmannin和QNZ可抑制NTC-Ms的作用。进一步研究发现，SCF和TLR4配体抑制肥大细胞脱颗粒和产生IL-10的功能涉及Tyr216-GSK3β磷酸化，其磷酸化抑制剂LiCl抑制肿瘤生长，消除了NTC-Ms、SCF/LPS对BMMCs自发性脱颗粒的抑制作用，且减弱了NTC-Ms、SCF/LPS诱导的BMMCs IL-10表达水平。以上结果表明，肿瘤微环境中的SCF和TLR4配体共同作用于肥大细胞，通过调节PI3K、NF-κB和Tyr216-GSK3β的磷酸化，调控肥大细胞脱颗粒和细胞因子释放，增强其促瘤生长功能。　　 综上所述，本研究探讨了肿瘤微环境对巨噬细胞和肥大细胞功能的影响，并初步探讨了其机制，为肿瘤的靶向治疗提供了理论依据。