论文部分内容阅读
肿瘤严重威胁人类的生命健康，探索其早期诊断新方法，实现患者治愈率和生存率的提高，是当前医学研究领域亟待解决的焦点问题。核酸适体作为一种新型的分子识别探针为肿瘤的早期诊断提供了一种可能的工具。基于催化作用的放大方法，例如脱氧核酶催化底物显色、纳米金颗粒催化银增长等技术，已广泛用于糖、DNA、蛋白质等生物分子的检测以提高其灵敏度。本论文借助核酸适体探针，结合脱氧核酶循环催化信号放大技术和纳米金颗粒催化银增长信号放大技术，以白血病细胞（CCRF-CEM）和非小细胞肺癌细胞（A549）为研究对象，以发展简单通用、高灵敏的肿瘤细胞检测方法为目的，完成了以下工作：1.基于脱氧核酶催化信号放大技术比色检测CCRF-CEM细胞利用脱氧核酶SP2.M序列形成G四聚体结构后催化2,2’-吖嗪-(3-乙酰苯基噻唑磺酸-6)（ABTS2-）生成绿色产物的性质，结合核酸适体Sgc8c对CCRF-CEM细胞的特异性识别，发展了一种基于核酶催化信号放大比色检测CCRF-CEM细胞的新方法。结果表明，本方法特异性好，对CEM的检测限为1000cells/mL。2.基于脱氧核酶催化信号放大技术比色检测A549细胞在第一部分工作基础之上，实现了利用脱氧核酶催化信号放大对A549细胞的检测。与选取的对照细胞（宫颈癌细胞（HeLa），正常肝细胞（L-02）和乳腺癌细胞（MCF-07））相比，本方法对A549细胞的检测特异性好，检测限为3000cells/mL。第一、二部分的工作的结果表明，基于脱氧核酶催化比色的方法对于悬浮细胞和贴壁细胞的检测均可适用，有望成为一种通用型的检测肿瘤细胞的方法。3.基于核酸适体和纳米金颗粒催化银增长的方法检测A549细胞利用与细胞特异性结合的核酸适体S6，结合纳米金颗粒催化银增长技术，通过细胞表面进行银增长后的灰度值定量检测A549细胞。结果表明，与对照细胞（舌癌细胞（TCA），乳腺癌细胞（MCF-07）和宫颈癌细胞（HeLa））相比，对A549细胞的检测特异性好，检测限为7000cells/mL。本方法是一种基于核酸适体识别的通用型的贴壁细胞原位检测新方法，有望进一步应用到肿瘤组织病理切片的检测。