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近年来乳腺癌已经成为女性最常见的恶性肿瘤。每年乳腺癌的发病率都在不断攀升,其中以包括我国在内的发展中国家最为迅速。乳腺癌的死亡率一直居高不下,特别是ErbB2过表达的乳腺癌患者。ErbB2基因在25%-30%的乳腺癌患者的癌组织中有过度表达,此类ErbB2过表达的乳腺癌生长速度快、侵袭性强,易发生早期转移。对放、化疗不敏感,易复发。故无病生存期短,预后差。Trastuzumab(商品名赫赛汀,Herceptin)是由罗氏制药生产的靶向ErbB2受体胞外段结构域IV区的人源化IgG1型抗体,已于1998年获得美国FDA批准用于ErbB2高表达转移性乳腺癌的治疗。但临床数据显示约70%的ErbB2过表达的乳腺癌患者对Trastuzumab治疗不产生反应,且大部分对Trastuzumab发生反应的患者也会在治疗开始1年内产生耐药。Pertuzumab,帕妥珠单抗(商品名Perjeta)是由罗氏制药生产的另一株靶向ErbB2受体胞外结构域II区的人源化单克隆抗体。由于Trastuzumab抑制ErbB2同源二聚体和配体非依赖的异源二聚体,而Pertuzumab抑制配体依赖的ErbB2异源二聚体,两者联合用药具有互补的抗肿瘤作用机理。尽管临床试验证实Trastuzumab和Pertuzumab二者联用在Trastuzumab耐药的患者中体现出一定的抗肿瘤活性,但其客观反应率仅为25%,而完全反应率低于8%。为了进一步提高ErbB2靶向抗体的疗效,我们通过筛选全人源噬菌体抗体库获得了一株靶向ErbB2受体胞外结构域II区的全人源单克隆抗体——H2-18,并且惊奇地发现其能够强有力地诱导ErbB2过表达乳腺癌细胞发生程序性细胞死亡(Programmed cell death,PCD)。本文中将深入研究H2-18在ErbB2过表达乳腺癌细胞,特别是Trastuzumab耐药乳腺癌细胞中的抗肿瘤作用,并阐述其诱导程序性细胞死亡的作用机制。通过MTS检测的细胞活力实验数据表明,虽然在Trastuzumab敏感细胞BT474和SKBR-3中,H2-18的作用效果逊色于Trastuzumab+Pertuzumab联用组及Trastuzumab单药组,但在Trastuzumab耐药细胞HCC1954及HCC1419中的作用效果却是最强的。并且其活力抑制率与其在敏感细胞中的相似,并未受耐药机制影响,暗示H2-18的作用机制不同于Trastuzumab。流式Annexin V及PI双染法结果显示在Trastuzumab敏感及耐药细胞中,H2-18皆能明显诱导其死亡,死亡细胞主要位于右上双阳性区。而其他抗体组不能产生这种作用。在体内实验中,我们构建了Trastuzumab耐药乳腺癌荷瘤裸鼠模型,通过对肿瘤大小及生长速度的观察,评价出H2-18组较其他抗体组具有明显优势。在对H2-18诱导程序性细胞死亡的机制研究中,我们确定这不是自噬,是一种caspase非依赖的,Bcl-2家族没有进行调节的死亡。利用TEM观察细胞形态,发现其不具有凋亡的特征,却与坏死更相似。进一步的研究发现,此死亡通路由激活RIP1而触发,导致ROS产生。升高的ROS激活JNK通路,JNK被磷酸化激活后转位入核,磷酸化底物c-Jun,活化的c-Jun最后通过转录水平的调节实现细胞的程序性死亡。H2-18具有独特的PCD诱导活性,能够有效抑制Trastuzumab耐药乳腺癌生长,有望成为新的乳腺癌靶向治疗候选药物。本研究还将为设计更为有效的ErbB2靶向治疗性抗体提供新的思路。