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目的：本研究的目的在于探讨靶向溶酶体药氯喹(CQ, chloroquine)抑制自噬与紫杉醇(PTX, Pacilitaxel)联合应用对非小细胞肺癌A549细胞的作用,观察二者联合用药对非小细胞肺癌是否具有协同作用,并进一步检测自噬相关标志物,为临床提高非小细胞治疗疗效及患者生存率提供理论依据。方法：通过氯喹及紫杉醇作用于A549细胞,以Lyso-Tracker Red DND-99进行细胞内溶酶体染色,采用荧光显微镜观察细胞内溶酶体变化,应用MTT比色法比较药物对A549细胞的生长抑制作用,Annexin V/PI双染色流式细胞仪测定凋亡,应用SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳测定药物作用后自噬标志物LC3-Ⅱ含量,进一步通过ELESA法测定细胞内外HMGB1含量变化。结果：1.细胞生长抑制率：不同浓度氯喹及紫杉醇处理A549细胞72小时后,细胞的存活率逐渐降低,呈浓度依赖性。氯喹在IC10浓度(1μmol/L)下联合不同浓度紫杉醇处理后,与紫杉醇单独处理明显降低了A549细胞的存活率,其IC50降低2.61倍(P<0.05)。2.HMGBl含量变化：不同浓度紫杉醇作用于A549细胞6小时或24小时,细胞内HMGBl浓度随着紫杉醇浓度及时间的增加而呈现下降的趋势(P<0.05)。而细胞上清中HMGBl浓度随着紫杉醇浓度及时间的增加而呈现上升的趋势(P<0.05)。3.自噬相关蛋白LC3-Ⅱ含量变化：不同浓度氯喹或紫杉醇作用于A549细胞6或24小时,LC3-Ⅱ/β-actin含量随着氯喹及紫杉醇浓度增加及作用时间延长而显著增加(P<0.05)。两者联合后,LC3-Ⅱ/β-actin含量增加更明显(P<0.05)。4.细胞内溶酶体变化：不同浓度紫杉醇作用于A549细胞24小时,随着紫杉醇浓度增加,细胞内溶酶体荧光强度增高,细胞内酸性溶酶体及囊性小空泡逐渐增多,呈现剂量依赖性(P<0.01)不同浓度氯喹作用于A549细胞6小时,随着氯喹浓度增加,细胞内溶酶体荧光强度降低,细胞内酸性溶酶体数量逐渐减少、体积增大(P<0.01)。固定浓度氯喹(1μmol/L)联合不同浓度紫杉醇作用于A549细胞24小时,随着紫杉醇浓度增加,细胞内溶酶体荧光强度逐渐降低,点灶状酸性溶酶体数量减少,呈现剂量依赖性(P<0.01),溶酶体体积显著增大,并且出现溶酶体融合破裂。5.细胞凋亡：不同浓度紫杉醇作用于A549细胞24小时,随着紫杉醇浓度增加,细胞早期凋亡率逐渐增加,呈现剂量依赖性,(P<0.05)。而联合氯喹后,细胞早期凋亡率比单用紫杉醇显著提高(P<0.05)。结论：紫杉醇可诱导A549细胞产生自噬及增加细胞的凋亡,呈现剂量依赖性,而通过氯喹抑制自噬中自噬溶酶体的作用可进一步增加A549细胞的生长抑制作用及凋亡率。在紫杉醇诱导A549细胞产生自噬的过程中,HMGB1在细胞上清中含量增加,细胞内含量降低,提示HMGB1是通过细胞分泌或死亡细胞释放而不是通过细胞内起作用,对预测自噬有一定作用。