蓖麻油羟基化脂肪酸累积相关基因的表达分析

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蓖麻油中含有约90%的蓖麻油酸(12-羟基十八碳-9-烯酸)。此羟基脂肪酸(HFA)在磷脂酰胆碱(PC)的sn-2位上合成,是由RcFAH12基因编码的△12-羟化酶催化。现有研究表明转基因植物大量累积蓖麻油的瓶颈是蓖麻油酸不能有效的从其“生产工厂"PC转移到其“储存仓库”甘油三酯(TAG)。磷脂酶(PLs),长链酰基辅酶A合成酶(LACSs),酰基辅酶A:溶血磷脂酰基转移酶(LPCATs),酰基辅酶A结合蛋白(ACBPs)和磷脂酰胆碱:甘油二酯转磷酸胆碱酶(PDCTs)可能在这个过程中发挥了重要作用,上述这些酶多由多个基因编码的不同亚型组成,由于这些酶所包含的家族成员繁多,功能复杂,到底哪些是在蓖麻进化过程中保留下来对HFA有特殊作用的酶,我们预期在蓖麻基因组数据库中钓取所有的同源基因。通过生物信息学方法,以已知的拟南芥相关基因为探针,BLAST和二次BLASTp搜索蓖麻基因组库初步确定了87个相关的同源基因。进一步分析蛋白质的结构和保守序列,确定了66个相关酶基因,包括51 RcPLs,4 RcACBPs,7Rc LACSs,3 RcLPCATs和IRc PDCT。随后,在种子三个发育阶段(授粉后19,33,47天),叶,雄花等5个不同组织,不同时期的器官中分析了这些基因的表达模式,结合RcFAH12的表达量分析,最终确定了9个种子特异性表达基因(其中包括8个RcPLs和1个RcLACS),可能对从HFA-PC上移除HFA有独特作用。同时构建了种子特异性表达载体CXSN-napin,种子特异性表达载体可以使TAG合成的相关基因在种子中特异表达,便于检测转基因植株种子的油脂含量及脂肪酸组成。将GFP绿色荧光蛋白连接到载体CXSN-napin上,验证载体的有效性,且过表达RcACBP基因到拟南芥转基因系CL7,分析其在HFA转移上的功能。本研究的目的在于深入探索蓖麻HFA-TAG合成的原理,为使用基因工程的方法大量生产蓖麻油提供必要的理论依据。
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