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日粮中的蛋白质在断奶仔猪肠道内被降解为小肽及游离氨基酸后被肠道上皮粘膜细胞吸收。断奶仔猪肠道粘膜氨基酸的吸收对蛋白质在其体内代谢起关键作用。本文旨在研究酸性和碱性氨基酸对断奶仔猪肠道氨基酸转运及吸收的影响,为断奶仔猪氨基酸及蛋白质营养研究提供基础理论数据。 试验一:利用小肠原位结节灌流技术,研究了酸性(天冬氨酸、谷氨酸)和碱性(赖氨酸、精氨酸、组氨酸)氨基酸对断奶仔猪肠道氨基酸吸收的影响。选取35日龄体重为10.0±1.0 kg的健康三元(杜×长×大)杂交断奶阉公仔猪27头,饲喂基础日粮10 d,对空肠(前端、中端)、回肠(中端、末端)实施原位结节手术。实验分为9组,每组3头仔猪,每头1个重复,每组灌注的氨基酸浓度分别为:①赖氨酸(Lys组)123 mg/L Lys,②精氨酸(Arg组)118 mg/L Arg,③组氨酸(His组)47 mg/L His,④天冬氨酸(Asp组)171 mg/L Asp,⑤谷氨酸(Glu组)307 mg/L Glu,⑥碱性氨基酸(BAA组)123 mg/L Lys+118 mg/L Arg+47 mg/L His,⑦酸性氨基酸(AAA组)171 mg/L Asp+307 mg/L Glu,⑧碱性与酸性氨基酸混合组(ABAA组)123 mg/L Lys+118 mg/L Arg+47 mg/L His+171 mg/L Asp+307 mg/L Glu,⑨空白对照组(C组)缓冲液。持续灌注120 min,分别在0-60 min和60-120 min时间段内(第60 min和第120 min)收集肠道样品,并在第120 min时采集前腔静脉、门静脉以及肠系膜静脉血液。分别测定肠道氨基酸净吸收量、氨基酸分泌量,以及血清中氨基酸含量。结果表明,1)在0-60 min时间段内,Lys组回肠末端Lys净吸收量显著高于其他肠段(P<0.05),Asp组空肠中端和回肠末端Asp净吸收量显著高于其他肠段(P<0.05);BAA组与His组和Arg组比较,回肠末端His和Arg的净吸收量有上升趋势(P>0.05);AAA组空肠酸性氨基酸净吸收量显著高于其他肠段(P<0.05); ABAA组空肠前端氨基酸净吸收量显著低于其他肠段(P<0.05)。2)在60-120 min时间段内,Arg组和His组空肠前端和空肠中端Arg和His净吸收量显著高于其他肠段(P<0.05),Asp组回肠中端Asp净吸收量显著高于其他肠段(P<0.05);ABAA组各肠段氨基酸挣吸收量无显著差异(P>0.05),AAA组和BAA组回肠中端与回肠末端氨基酸净吸收量显著高于其他肠段(P<0.05),空肠中端和空肠前端碱性氨基酸净吸收量最高(P<0.05)。0-60 min与60-120 min两个收集时间段相比较,60-120 min时间段肠段氨基酸吸收量有增高的趋势。Lys组、Arg组、His组、Asp组和Glu组肠系膜静脉血清中相应的碱性氨基酸量显著升高(P<0.05),对应酸性氨基酸含量降低(P<0.05)。本研究结果显示,在小肠吸收氨基酸过程中,开始时,碱性氨基酸在回肠末端的吸收效率较高;60 min后碱性氨基酸在空肠前端吸收效率最高。随着小肠氨基酸吸收时间的延长,小肠酸性和碱性氨基酸吸收效率有上升趋势。肠腔中底物氨基酸的种类会影响小肠酸性和碱性氨基酸的吸收效率,其它的碱性氨基酸可促进His和Arg的吸收。 试验二:利用Ussing chamber方法,研究了断奶仔猪酸性和碱性氨基酸肠道转运过程中电生理的变化。选取35日龄体重为10.0±1.0 kg的健康三元(杜×长×大)杂交断奶阉公仔猪27头,饲喂基础日粮10d。屠宰后取空肠粘膜于Ussingchamber系统上检测。实验分9组,每组6个重复,每组在扩散池加1 mL氨基酸溶液如下:①Lys组615 mg/L Lys,②Arg组590 mg/L Arg,③His组235mg/LHis,④Asp组855 mg/LAsp,⑤Glu组1535mg/LGlu,⑥BAA组615 mg/L Lys+590 mg/L Arg+235 mg/L His,⑦AAA组855 mg/L Asp+1535 mg/L Glu,⑧ABAA组2615 mg/L Lys+590 mg/L Arg+235 mg/L His+855 mg/L Asp+1535 mg/LGlu。接收室加1mL等浓度的甘露醇,空白对照组扩散池和接收室两侧加1 mL等浓度的甘露醇。检测氨基酸转运40 min后空肠粘膜氨基酸转运量及氨基酸转运过程Isc和△R的变化。结果表明,各组Lys的转运量无显著差异(P>0.05),Arg组Arg转运量和His组His转运量为负值,显著低于BAA组和ABAA组。ABAA组酸性氨基酸转运量显著高于Glu组和Asp组。BAA组短路电流在0-10min时显著下降(P<0.05),之后趋于平衡。其他组短路电流在氨基酸转运过程中变化不明显(P>0.05)。在扩散池添加氨基酸后各实验组电阻即刻增加,与对照组比较显著增大(P<0.05),△R大约为15Ω,40 min后趋于平稳,整个过程电阻总的上升大约20Ω。可见,酸性和碱性氨基酸在转运过程中肠道粘膜的短路电流变化不明显,氨基酸在转运过程中是一个缓慢的过程。氨基酸在转运过程中肠道粘膜电阻增大,粘膜抗阻力增强,仔猪肠道屏障增强。 试验三:酸性和碱性氨基酸对肠上皮细胞氨基酸转运载体的影响。利用IEPC-J2细胞,通过细胞模型构建,检测IPEC-J2细胞增殖率,筛选出最适的酸性和碱性氨基酸浓度。实验分9组,分别用酸性和碱性氨基酸处理IPEC-J2细胞24h,各种氨基酸浓度如下:①Lys组1.2 mM Lys,②Arg组0.4 mM Arg,③His组0.8 mM His,④Asp组1 mM Asp,⑤Glu组0.6mM Glu,⑥BAA组1.2 mM Lys+0.4 mM Arg+0.8 mM His,⑦AAA组1mmolL Asp+0.6 mM Glu,⑧ABAA组1.2 mM Lys+0.4 mM Arg+0.8 mM His+1 mmolL Asp+0.6 mM Glu。实时荧光定量检测IPEC-J2细胞氨基酸转运载体的表达量。结果表明,碱性氨基酸可促进肠上皮细胞的增殖,当Lys浓度为1.2 mM时细胞增殖率最高(P<0.05),Arg浓度为0.4 mM时细胞增殖率最高(P<0.05),His浓度为0.8 mM时细胞增殖率最高(P<0.05)。酸性氨基酸会抑制肠上皮细胞的增殖,当Asp和Glu浓度分别为1 mM和0.6 mM时,肠上皮细胞增殖率下降50%左右。与对照组比较,Lys组和His组y+LAT1 mRNA表达量显著提高(P<0.05)。AAA组xCT mRNA和EAAT3mRNA表达量显著提高(P<0.05),y+LAT1 mRNA和CTA1 mRNA表达量显著降低(P<0.05)。研究结果表明,Lys和His可促进y+LAT1的表达,酸性氨基酸虽然可以提高酸性氨基酸转运载体的表达,但抑制了细胞的增殖。