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背景和目的:和厚朴酚(Honokiol)是中药厚朴中最主要的活性成分之一,具有钙通道阻滞的作用。钙拮抗作用说明其存在治疗心血管疾病的可能价值。高血压是心血管系统常见疾病,前期发现和厚朴酚具有整体降血压作用,并在乳鼠心肌细胞上发现它有抑制细胞收缩作用,但它对成年大鼠心肌细胞的作用及其与细胞内钙的关系尚不清楚。本研究的目的在于明确Honokiol对成年大鼠心肌细胞的收缩功能的影响及其作用机制,并初步探讨Honokiol作用心肌细胞的影响机制是否与自噬相关。 方法:使用Langendorff灌流装置分离成年大鼠心肌细胞,所得新鲜细胞用2μmol/L Fura-2/AM荧光试剂避光孵育30 min,用不同浓度的Honokiol对细胞进行灌流(0.1μM、1μM、10μM);用IonOptix光谱荧光检测系统检测,得到30 min内心肌细胞钙瞬变的整体变化趋势和收缩性的整体变化趋势,再用IonWizard软件分析图形数据,得到钙瞬变和收缩的各项指标值;钙敏感性实验以不同浓度CaCl2(1.8 mM、2.4mM、3.6mM、5.4mM)灌流已经孵育过Honokiol1μM的心肌细胞,记录灌流CaCl2后心肌细胞钙瞬变和收缩性的各项指标;用Honokiol1μM灌流已经孵育AngiotensinⅡ100nM、isoprenaline1μM、Rapamycin100nM和3-Methyladenine2mM的心肌细胞,观察心肌细胞钙瞬变、收缩性和钙敏感性的各项指标。 结果: (1)心肌细胞钙瞬变结果显示,Hon组钙瞬变的 BL值、peak值均有显著的下降趋势。收缩结果显示,Hon0.1μM组收缩的PS值、±dL/dtmax值无明显差异;Hon1μM、10μM组收缩的PS值、±dL/dtmax值有显著降低。 (2)钙敏感性实验结果显示,Honokiol对心肌细胞的影响与外钙改变无明显关系。 (3)与Con组相比,AngiotensinⅡ组钙瞬变的BL值、peak值均有显著的下降趋势;收缩性指标无明显变化。与Honokiol共同作用心肌细胞,Honokiol减少了AngiotensinⅡ细胞内的钙离子浓度,并部分阻断了AngiotensinⅡ兴奋细胞收缩力的作用。对比Con组,isoprenaline组钙瞬变的BL值、peak值均有显著的下降趋势;收缩的PS值、±dL/dtmax值均显著的下降趋势;与Honokiol共同作用心肌细胞,Honokiol减少了 isoprenaline细胞内的钙离子浓度,也可阻断isoprenaline对细胞收缩力的作用。 (4)与Con组相比,Rapamycin组钙瞬变和收缩值均无明显差异,但与Honokiol共同作用心肌细胞,能阻断Honokiol减少细胞内的钙离子浓度,改变Honokiol钙敏感性水平,但不能阻断 Honokiol减弱细胞收缩力的作用。对比 Con组,3-Methyladenine组钙瞬变的BL值、peak值均有显著的下降趋势;收缩的±dL/dtmax值均有显著的下降趋势,PS值、TPS50%值无明显差异;与Honokiol共同作用心肌细胞,能阻断 Honokiol减少细胞内的钙离子浓度,改变Honokiol钙敏感性水平,同时能部分阻断Honokiol减弱细胞收缩力的作用。 结论:Honokiol通过降低心肌细胞内自由钙离子而抑制心肌细胞的收缩功能,不影响心肌细胞收缩的钙敏感性。能部分阻断 AngiotensinⅡ兴奋细胞收缩力的作用。Rapamycin、3-Methyladenine能阻断 Honokiol减少细胞内的钙离子浓度作用,3-Methyladenine能部分阻断Honokiol减弱细胞收缩力的作用,初步判断其机制可能与自噬相关。