论文部分内容阅读
本论文通过正交试验,确定了黄花蒿提取物的最佳提取工艺条件,并采用GC-MS和LC-MS测定了其中的活性成分。在此基础上,采用体外批次试验、饲养试验、乳腺动静脉血插管试验和乳腺组织体外培养试验,系统地研究了黄花蒿提取物对体外C18不饱和脂肪酸氢化率、体内VFA等瘤胃内环境指标、瘤胃、血液、乳中VA、CLA和脂肪酸的变化以及乳腺组织SCD酶等的影响,初步探讨了黄花蒿提取物对乳中CLA的影响和作用机制。本研究共分为五部分:第一部分黄花蒿活性成分的最佳提取工艺条件和其活性成分的研究本试验选用黄花蒿,采用正交试验,根据得率高低确定最佳提取工艺条件,并通过GC-MS和LC-MS测定了黄花蒿提取物的活性成分。结果表明:①黄花蒿提取物的最佳提取工艺条件是乙醇浓度为55%、提取温度为95℃和提取时间为2 h;②使用GC-MS和LC-MS测定的黄花蒿提取物的活性成分主要包括倍半萜类、芳香族类、脂肪酸类、甾体类、黄酮类、三萜类、脂肪族类、生物碱类、酚类、杂环类、萜类及其它化合物类的物质。第二部分黄花蒿提取物对瘤胃培养液内VA、CLA、C18不饱和脂肪酸氢化率及其它脂肪酸组成影响的研究本试验通过体外批次试验,选用黄花蒿提取物的冻干粉作为添加剂,添加剂量分别是0、3、30、300和3000mg/L。结果表明:①随着培养时间的延长,C18(c9C18:1、C18:2和C18:3)不饱和脂肪酸氢化率均逐渐上升,到24h达到最高值,此时亚油酸C18:2生物氢化率在68.33-82.71%之间,亚麻酸C18:3氢化率在54.37-82.11%之间,但C18不饱和脂肪酸的组成逐渐被氢化而减少,到24h降到最低。②随着培养时间的延长,氢化生成的VA逐渐增加,到24h达到最高值;CLA逐渐被氢化而减少,到24h降到最低,24h的VA/CLA在18.79-41.06之间,添加黄花蒿提取物增加了培养液中VA的含量。第三部分黄花蒿提取物对奶山羊瘤胃内环境指标和瘤胃、血液及乳中脂肪酸组成影响的研究本试验选择9只体重约38㎏的泌乳期(泌乳天数120+15d)关中奶山羊,安装永久性瘤胃瘘管。采用3×3拉丁方试验设计,试验分为对照组和2个处理组(处理一组和处理二组,黄花蒿提取物的添加量分别为每只7.26g/d和12.10g/d),分3期进行;每期30天,前14天为适应期,15～30天为采样期。结果表明:①添加黄花蒿提取物的两个处理组有增加瘤胃液pH值的趋势;②两个处理组有降低NH3-N浓度的趋势;③两个处理组有降低TVFA浓度、乙酸浓度、丙酸浓度和丁酸浓度的趋势,有增加A/P的趋势;④添加黄花蒿提取物增加了瘤胃液、血液中VA含量,有降低C18不饱和脂肪酸含量的趋势;⑤添加黄花蒿提取物增加了羊奶中VA和CLA含量,与对照组相比,处理二组显著增加了VA和CLA的含量;⑥处理一组有增加采食量的趋势,处理二组有降低采食量的趋势;⑦两个处理组有增加产奶量的趋势,有增加乳成分的趋势。第四部分添加黄花蒿提取物对奶山羊阴外动脉和乳静脉内脂肪酸组成的变化及乳腺组织中与CLA合成相关酶的mRNA丰度影响的研究本试验选择9只体重在38+3.12㎏的泌乳期(泌乳天数210+15d)关中奶山羊。试验分为3组,分别为对照组和处理一和处理二组(同第三部分试验)。预饲期30天,然后在阴外动脉和乳静脉安装血插管进行正式试验,正式试验期9天,最后2天连续采集乳腺阴外动脉和乳静脉的血用于脂肪酸的测定。结果表明:①添加黄花蒿提取物能增加动静脉血液中VA和CLA的含量;②乳腺组织合成中短链脂肪酸,但不能合成长链脂肪酸;③添加黄花蒿提取物降低了SCD酶丰度、ACC酶的丰度,增加了FAS酶的丰度,试验一组显著增加了LPL酶丰度,试验二组显著降低了LPL酶丰度。第五部分体外乳腺组织培养研究黄花蒿提取物对乳腺上皮细胞中CLA、VA等含量的影响。本试验体外乳腺组织培养中,乳腺组织来源于一头健康的泌乳奶牛,黄花蒿提取物的添加剂量分别为0 mg/L、2.5 mg/L、5 mg/L和10 mg/L四个组。结果表明:①添加黄花蒿乙醇提取物抑制了乳腺上皮细胞的生长;②三个处理组均增加了乳腺上皮细胞中CLA的含量,这表明乳腺组织培养中添加黄花蒿乙醇提取物似乎有增加SCD酶活性的趋势;③油红O染色试验间接说明添加黄花蒿乙醇提取物有增加乳脂的趋势。