γδ T细胞兼具特异性和非特异性免疫应答双重特征，在抗肿瘤免疫中具有不可或缺的作用，现已成为癌症过继免疫治疗的一个新的候选效应细胞。迄今为止，仅鉴定出很少的γδTCR的配体。因此，寻找肿瘤特异性抗原或肿瘤相关抗原是攻破肿瘤免疫治疗难关的主要问题之一。在本课题的前期研究中发现，来自卵巢癌组织浸润的γδ T细胞可杀伤卵巢癌、胃癌等多种肿瘤细胞。理论上说，γδ T细胞是通过其抗原受体(TCR)来识别肿瘤抗原的，而与抗原表位结合部位是其互补决定区-3(CDR3)。我们已经证实TCR Vδ<,2> CDR3合成多肽(CDR3δ合成肽)可特异性与卵巢癌等多种肿瘤细胞或组织结合。因此，利用TCR的CDR3多肽来寻找抗原表位是本课题组近年来创立的新策略。在本研究中，我们应用该项新策略即以肿瘤反应性的CDR3δ合成肽作为探针，在噬菌体十二肽库中，筛选γδ TCR识别的抗原表位肽，对γδT细胞的抗原识别机制进行初步研究。 本研究完成的主要工作及其结果如下： 首先，以肿瘤反应性的CDR3δ合成肽(OT1、OT3)为探针，在噬菌体肽库中，筛选特异性结合的十二肽。通过用非特异性洗脱方法筛库，探针OT1得到了七条十二肽，但氨基酸序列不完全相同，只含有共有序列：WHWW/WHW/HW。探针OT3肽通过特异性与非特异性洗脱两种方法得到了四条优势序列：FHWSWYTPSRPS、HNWYHWWMPHNT、YPHNWWHSVSPW和WPHNWWPHFKVK。 其次，我们分析优势序列，选择合成了三条十二肽(除HNWYHWWMPHNT外)作为候选的抗原表位(synthesized candidates of epitope peptides，seEPs)，对其进行初步的生物学分析。通过直接ELISA和流式细胞技术，从分子和细胞水平验证合成的seEPs与探针肽及γδT细胞的TCR特异性结合。并且，利用固相扩增和MTT的方法，验证seEPs对γδT细胞群体的增殖作用。此外，预处理scEPs与γδT细胞，发现所选用的十二肽，尤其是特异性洗脱得到的十二肽可以促进γδT细胞的杀伤作用。这些结果均提示seEPs具有γδT细胞特异识别的抗原表位的特性，可能是γδTCR识别的抗原表位。上述结果显示本研究所建立的用肿瘤反应性的CDR3δ合成肽筛选抗原表位的策略是正确的，方法是可行的。这一策略将为阐明γδT细胞抗原识别机制及围绕γδT细胞所进行的肿瘤免疫治疗的研发奠定实验基础。