大鼠神经元机械性损伤后C-fos、Bcl-2和Caspase-3蛋白表达及细胞凋亡的研究

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目的:研究大鼠神经元机型性损伤后C-fos、Bcl-2与Caspase-3蛋白表达改变及其神经细胞凋亡情况,以及它们在神经元凋亡过程中的相互作用机制,分析急性脑创伤的病理和病理生理变化,提高对急性脑创伤的治疗水平。方法:取新生Wistar乳鼠大脑皮层进行神经元分离、接种及培养。培养7天至神经元成熟后,通过光镜、细胞免疫荧光对体外培养的神经元细胞进行神经元纯度鉴定。应用10ul微量移液器枪头划割细胞,造成神经元不同程度机械性损伤,并以划伤道数分为轻、中和重度损伤组。研究神经元机械性损伤后细胞形态学变化,检测细胞存活率和培养液乳酸脱氢酶活性变化。应用细胞免疫法检测机械性损伤后不同损伤程度组别间神经元Bcl-2、C-fos、Caspase-3蛋白表达的差异。应用流式细胞仪检测细胞凋亡相对率,应用统计学方法分析两者相关性。结果:神经元体外培养7天成熟后,根据细胞形态、细胞免疫荧光染色神经元细胞阳性率达90%。机械性划割后可见细胞凋亡。神经元机械性损伤后细胞存活率下降,培养液乳酸脱氢酶活性升高。机械性损伤各组都有Bcl-2、C-fos、Caspase-3蛋白的表达,且不同损伤程度组别间表达水平具有显著性差异。重度损伤组Bcl-2、C-fos、Caspase-3分别显著高于中度损伤组及轻度损伤组(P<0.05),C-fos蛋白1h后即有表达,24h达高峰。Bcl-2、Caspase-3表达持续时间较长,且48-72h达高峰。流式细胞术分析显示各组细胞的凋亡率不同,重度损伤组凋亡率显著高于中度损伤组及轻度损伤组(P<0.05)。结论:新生大鼠大脑皮层组织体外原代培养生成的神经元纯化率较高。划痕损伤对神经元有确切的致伤作用。依据划伤范围不同,可造成不同程度的神经元损伤。神经元损伤后C-fos、Caspase-3、Bcl-2在损伤过程中起到非常重要的作用,它们共同参与神经元细胞的凋亡。
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