中国是茶的故乡,是世界茶文化起源和传播的中心,“茶叶之路”成为中外经济文化沟通交流的桥梁和纽带。时至今日,全世界五大洲有50多个国家种植茶。茶叶早期被用于祭祀和疾病的治疗,随着社会的进步和茶文化的发展,茶被用于日常消费的饮品。现代技术和科学一直在探索茶的生物应用和对人类健康的价值。茶的健康影响因其生物化学组成和药物特性而不同。六大茶类中绿茶的健康功效被广泛研究和使用。绿茶中的茶氨酸是最主要的氨基酸。茶氨酸是一种抗氧化和消炎物质,可有效预防和治疗慢性肝炎,如糖尿病,肥胖,失眠,消化道,癌症,疲劳,心血管疾病和神经炎症。在本研究中,我们通过利用高浓度茶氨酸筛选酵母突变体库,进而获得对茶氨酸不敏感的酵母突变体,并且对不敏感酵母突变的基因进行分析,我们研究的第一阶段就是筛选出茶氨酸胁迫的最适浓度。在正常YNB培养基中分别加入茶氨酸母液使其最终浓度为0mM,10mM,20mM,30mM,40mM,50mM,吸取140μL YNB与茶氨酸混合液和10 μL酵母野生型BY4743菌液于96孔板中,在30℃,150rpm条件下进行培养,摇菌10h后,每隔5h检测一次酵母OD590值,并记录。最终我们筛选酵母突变体所用的茶氨酸的最适的高浓度是40mM;选择不同浓度茶氨酸处理后酵母生长差异最大的时间点为25小时;选择抑制率为60%为茶氨酸抑制酵母突变体的筛选浓度。实验的第二阶段是在合适的条件下对酵母突变体进行筛选。试验条件是在正常YNB培养基中分别加入40mM茶氨酸,吸取140μLYNB与茶氨酸混合液和10μL菌液于96孔板中,在30℃,150rpm条件下进行摇菌,25小时后检测酵母OD590值,并记录。实验的第三阶段是将酵母茶氨酸不敏感突变体进行固体培养基的打点试验。进一步验证液体筛选的结果同时进行这些酵母突变体基因的分析。我们试验筛选一共5700个突变体,发现了 554个对茶氨酸不敏感突变体。最终分析出这些对茶氨酸不敏感的酵母突变体基因主要与转运、细胞代谢,蛋白调控、DNA损伤修复等过程相关,这将有利于我们进一步分析茶氨酸在细胞内的转运及代谢过程。这些筛选出的茶氨酸不敏感突变体,也将是我们研究茶氨酸转运与代谢的重要材料。